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[目的]
通过观察正常早孕与自然流产患者子宫蜕膜基质细胞在性激素作用下白细胞介素-18(interleukin-18，IL-18)的表达，以及子宫自然杀伤细胞(uterine naturalkiller cells，uNK cells)在孕激素作用下细胞亚群的变化，探讨IL-18、uNK细胞与自然流产三者之间的关系。
[方法]
1.将13例正常早孕患者(Normal early pregnancy group，N组)及15例自然流产患者(Spontaneous abortion group，S组)子宫蜕膜细胞进行原代培养后，按以下方式将两组分别分为10组进行处理，即对照组(Control group，C组)、HCG(人绒毛膜促性腺激素)组(浓度分别为10、100、1000mIU/ml，对应为H1、H2、H3组)，Estradiol(17β-雌二醇)组(浓度分别为10-7、10-8、10-9mol/L，对应为E1、E2、E3组)，Progesterone(孕酮)组(浓度分别为10-6、10-7、10-8mol/L，对应为P1、P2、P3组)。
2.免疫组化分析正常早孕及自然流产患者子宫蜕膜组织形态及IL-18表达变化。
3.各组分别在药物作用24、48、72h后，采用MTT方法检测细胞增殖情况；用ELISA方法检测细胞培养上清液IL-18含量。
4.孕激素作用下子宫蜕膜细胞与子宫蜕膜单核细胞共培养，免疫组化分析孕激素作用后子宫蜕膜细胞上IL-18的表达，流式细胞仪检测子宫自然杀伤细胞亚群比率的变化。
[结果]
1.药物作用对蜕膜基质细胞增殖能力的影响药物作用24h后H2组、P1组、P2组蜕膜基质细胞增殖能力较对照组降低(p<0.05)，但随着培养时间延长，各剂量组HCG、Estradiol、Progesterone刺激对其增殖能力均无显著影响(p>0.05)。
2.药物作用对细胞培养上清液中IL-18含量的影响对照组蜕膜基质细胞培养48h及72h，自然流产组的IL-18含量较正常早孕组显著增高(p<0.05)。
2.1正常早孕组组内比较2.1.1 HCG组：
药物作用24h后，各剂量组IL-18含量低于对照组，差异均有统计学意义(p<0.05)。
药物作用48h后，H1组IL-18含量高于对照组，差异有统计学意义(p<0.05)。H2、H3组与对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
药物作用72h后，H1、H2、H3组IL-18含量与对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。
2.1.2 Estradiol组：
药物作用24h后，E1、E2、E3组IL-18含量与对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。
药物作用48h后，E1组IL-18含量高于对照组，差异有统计学意义(p<0.05)。E2、E3组与对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
药物作用72h后，E1、E2、E3组IL-18含量与对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。
2.1.3 Progesterone组：
药物作用24h、48h、72h后，P1、P2、P3组IL-18含量与对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。
2.2自然流产组组内比较2.2.1 HCG组：
药物作用24h后，H3组IL-18含量高于对照孔，差异有统计学意义(p<0.05)。H1、H2组与对照组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
药物作用48h后，H1、H2、H3组IL-18含量均低于对照组，差异有统计学意义(p<0.05)。
药物作用72h后，H3组IL-18含量低于对照组，差异有统计学意义(p<0.05)。H1、H2组IL-18含量与对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。
2.2.2 Estradiol组：
药物作用24h、48h后，E1、E2、E3组IL-18含量与对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。
药物作用72h后，E1、E2组IL-18含量均较对照组降低，差异有统计学意义(p<0.05)。
2.2.3 Progesterone组：
药物作用24h、48h后，P1、P2、P3组IL-18含量与对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。
药物作用72h后，P1、P2、P3组IL-18含量均较对照组降低，差异有统计学意义(p<0.05)。
2.3正常早孕组与自然流产组组间比较：
2.3.1 HCG组：
药物作用24h后，自然流产组H1、H2、H3组IL-18含量均高于正常早孕组，差异有统计学意义(p<0.05)。
药物作用48h后，自然流产组H1、H2组IL-18含量低于正常早孕组，差异有统计学意义(p<0.05)。自然流产组H3组与正常早孕组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
药物作用72h后，H3组IL-18含量高于正常早孕组，差异有统计学意义(p<0.05)。
自然流产组H1、H2组与正常早孕组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
2.3.2 Estradiol组：
药物作用24h、72h后，自然流产组E1、E2、E3组IL-18含量与正常早孕组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
药物作用48h后，自然流产组E3组IL-18含量高于正常早孕组，差异有统计学意义(p<0.05)。自然流产组E1、E2组与正常早孕组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
2.3.3 Progesterone组：
药物作用24h、48h、72h后，自然流产组P1、P2、P3组IL-18含量与正常早孕组比较差异无统计学意义(p>0.05)。
2.4药物作用72h后，P1、P2、P3、E1、E2组各组之间IL-18含量差别无统计学意义(p>0.05)。
3.免疫组化实验结果：正常早孕组和自然流产组患者蜕膜组织均有IL-18表达，两组表达强度无显著差异。
自然流产组在蜕膜间质细胞胞浆IL-18的表达较正常早孕组明显，但二者表达差异无统计学意义。
自然流产组在蜕膜腺体细胞胞浆IL-18的表达与正常早孕组比较，二者表达强度无显著差异。
4.孕激素作用后细胞免疫组化实验结果：
正常早孕组和孕激素作用前后的自然流产组蜕膜基质细胞胞浆均有IL-18表达。对照组IL-18表达以中度阳性(++)为主，实验组以强阳性(+++)为主，药物组以中度-强阳性(++～+++)为主，3组间两两比较均有显著差异(p<0.05)。
5.子宫自然杀伤细胞流式细胞检测实验结果：
CD56+CD16-NK细胞数量：正常早孕蜕膜NK细胞>孕激素作用后自然流产蜕膜NK细胞>自然流产蜕膜NK细胞(两两比较均有差异，p>0.05)；
各组间CD56+CD16+、CD56-CD16+NK细胞两两比较无差异。
[结论]
从实验结果来看，子宫蜕膜基质细胞体外培养时具有良好的生物活性。HCG、E2、P4作用对子宫蜕膜基质细胞的增殖能力并无改变。适当的激素作用能降低体外培养自然流产患者子宫蜕膜基质细胞上清液中IL-18的分泌并至正常早孕水平。孕激素能显著减少体外培养自然流产患者子宫蜕膜基质细胞IL-18的表达，但其表达水平仍明显高于正常早孕患者水平。孕激素能增加体外培养自然流产患者uNK细胞中CD56+CD16-uNK细胞百分率，但仍明显低于正常早孕患者水平。
我们认为性激素尤其是孕激素能改善IL-18与CD56+uNK细胞数量间的相对不平衡状态，这是改善妊娠结局的相关因素之一，但这种平衡状态的作用机制及与其他细胞因子的相互作用仍有待于进一步的研究。