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本课题是在已研制成功的非阿片类镇痛中药基础上,进一步研究非阿片类中药的镇痛机理。痛必定注射液是导师根据中医理论,密切结合临床,研制成的具有有活血化瘀,行气止痛功效的中药针剂。本研究在前期实验的基础之上,进一步探讨痛必定对背根神经节离子通道的影响,以揭示其镇痛作用的机理。
实验目的:(1)制作国际上广泛承认并使用的CCI模型,用以研究痛必定对于慢性疼痛的镇痛作用。(2)证实痛必定具有良好的镇痛作用,且研究其是否作用在阿片类受体上,是否为非阿片类的镇痛中药。(3)研究痛必定对于正常大鼠DRG神经元内钙离子电流的影响。(4)研究痛必定对正常大鼠DRG细胞钙通道抑制作用的亚型选择性。
研究方法:(1)运用“Bennett-Xie”的方法,制作CCI模型,通过对大鼠压痛、冷敏和热痛指数的测定,来判断CCI模型是否成功。(2)运用阿片类受体拮抗剂纳洛酮作为工具药,注射痛必定前 5min注射盐酸纳洛酮,观察痛必定的镇痛效果是否被纳洛酮所阻断。(3)运用膜片钳方法研究痛必定对于急性分离的正常大鼠DRG神经元内钙离子电流的影响。(4)在膜片钳下,运用配对给药的方法,研究痛必定对于钙电流抑制作用亚型的选择。
结果:(1)CCI术后大鼠的压痛、冷痛、热痛阈值均明显降低,且14d后仍维持在较低水平,无自行恢复的现象。(2)痛必定的镇痛作用没有被纳洛酮阻断。(3)应用痛必定后,急性分离的正常大鼠DRG细胞内钙离子电流的峰值明显降低。(4)痛必定与N型钙离子通道阻滞剂对于DRG细胞内的钙离子电流有相似的抑制作用,与L型钙离子通道阻滞剂对于DRG细胞内的钙离子电流的抑制作用有明显差异。
结论:(1)CCI模型具有慢性疼痛的特点,可以用于镇痛药物的研究,且有造模成功率高,动物成活率高的特点。(2)痛必定具有良好的镇痛效果,且其并不作用在阿片类受体上,是非阿片类的镇痛中药。(3)痛必定能抑制急性分离的正常大鼠DRG细胞内的钙离子电流。(4)痛必定对于急性分离的正常大鼠DRG细胞内N型钙离子通道有选择性的阻滞作用。