【摘 要】
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【目的】获得日本血吸虫细胞浆铜锌超氧化物歧化酶(5j.CT Cu/Zn-SOD)基因全长编码序列,研究基因的保护性效果.【方法】将曼氏血吸虫(S.m)的CT Cu/Zn-SOD全长cDNA序列上网比对
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【目的】获得日本血吸虫细胞浆铜锌超氧化物歧化酶(5j.CT Cu/Zn-SOD)基因全长编码序列,研究基因的保护性效果.【方法】将曼氏血吸虫(S.m)的CT Cu/Zn-SOD全长cDNA序列上网比对,寻找日本血吸虫相关EST.设计特异性引物从日本血吸虫尾蚴cDNA文库扩增全长编码序列,利用生物信息学技术对所获得的序列进行分析和鉴定.将基因的全长cDNA编码区克隆入PET30a(+)和PEGFP-N1载体,构建原核和真核表达质粒.在大肠杆菌中表达并纯化组氨酸标签蛋白,进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定、酶活性测定.以小鼠为动物模型,用重组真核表达质粒和重组蛋白进行DNA免疫和蛋白免疫研究.通过检测免疫小鼠血清中IgG的滴度变化和减虫率、减卵率来对Sj.CT Cu/Zn-SOD的免疫保护性效果进行评价.【结论】①通过生物信息学方法,识别并获得了Sj.CT Cu/Zn-SOD全长编码序列.②成功构建的重组原核表达质粒和重组真核表达质粒.③用核酸和蛋白免疫技术,观察了小鼠模型中Sj.CT Cu/Zn-SOD重组质粒和重组蛋白免疫后引起的免疫反应以及抗攻击感染的保护性效果.发现:Sj.CT Cu/Zn-SOD具有一定的减虫和减卵效果,提示Sj.CTCu/Zn-SOD具有潜在的疫苗研究开发价值.
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