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原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一。由于起病隐匿，确诊时多已属中、晚期。治疗效果差，预后恶劣，发病率有逐年增高的趋势。目前肝癌治疗仍是以手术为首选方法，凡是孤立的肿瘤或多发肿瘤但较局限，肝功能代偿，无重要器质性心、肺、脑、肾等疾病者均应争取手术切除治疗。但由于其早期诊断率低，且大多数患者伴有肝硬化，或因其它原因能行手术者不超过30％。因此，研究一种微创、安全、有效的治疗方法非常重要。近年来，许多局部微创疗法已用于肝癌的治疗当中，如局部“无水酒精注射”、“射频消融”、“激光”、“冷冻”及“微波”等疗法，效果均较好。其中，射频消融(RadioFrequencyablation，RFA)最为突出，具有微创、安全、经济和可重复操作等优点。目前，它己被广泛用于人体许多部位肿瘤的治疗，如脑部肿瘤、肌肉骨胳系统肿瘤、甲状腺及甲状旁腺肿瘤、胰脏、肾脏、肺部及乳腺等部位肿瘤，但以肝癌射频消融治疗最受关注。尽管如此，射频消融治疗仍然存在着许多问题。如射频消融对人体机能有何影响，如何提高肿瘤组织坏死范围和程度，如何减少肿瘤细胞残留、复发或种植转移、避免影响射频效果的各种因素和并发症的发生等，对这些问题的研究仍然具有重要意义。
目的: 1、观察不同加热方法及肝血流对射频毁损的影响，为临床治疗提供参考。
2、比较单纯射频与射频联合多齿针无水酒精注射两种方法对活体猪肝脏所造成的毁损情况，为临床治疗提供依据。
材料与方法 1、实验对象、材料及分组1.1.仪器与试剂RF2000TM射频治疗系统(美国RadioTherapeutics公司生产)，该系统由射频发生仪、EBV集束射频电极针及电脑控制系统组成，射频发生仪最大功率90W，频率460KHz；EBV集束电极针粗14G，长15cm，其内有十根微电极，微电极张开后如菊花状，最大直径为3.5cm。无水酒精注射用针采用美国宾州Rexmedical公司生产的Quadra-Fuse(Multi-ProngedInjectionNeedle-多齿针)，粗18G，长15cm，由1根母针和3根可伸缩的子针构成，每根子针有4个侧孔，总共可向十三个不同方向喷射酒精，该针末端每1cm有1个刻度标志，共5个，在推注时当到达该标志后即可听到轻微“卡嗒，，声。其它包括动物实验手术器械和设备、组织病理检查设备、麻醉药品(氯胺酮)及其它有关器械、药品及用具等。
1.2.实验动物健康家猪24只，体重30±2.5Kg，雌雄不限。由广州医学院实验动物中心提供。
1.3.分组将24只健康家猪按阻断与不阻断入肝血流情况分为Ⅰ、Ⅱ两大组(Ⅰ组为阻断入肝血流组，Ⅱ组为不阻断入肝血流组)，每组各12只。然后将每组均再分为A、B、C、D四小组，各小组3只。A组为：单纯射频单相式加热组。B组为：单纯射频双相式加热组。C组为：射频联合多齿针无水酒精注射单相式加热组。D组为：射频联合多齿针无水酒精注射双相式加热组。
2.方法健康家猪实验前晚禁食。术前行耳静脉穿刺建立静脉通道，予以氯胺酮静脉全麻(肌肉注射氯胺酮6～10mg/kg、阿托品0.02mg/kg后，间断静脉推注氯胺酮约首剂一半或更少剂量维持)，背、臀部剃毛，贴射频电极板。腹部术野常规消毒铺巾，正中切口进腹，探查、显露肝脏后，选择每一肝叶组织较厚的部位插入射频针，张开微电极，连接RF2000TM射频治疗仪，开始射频加热毁损。根据上述分组的不同采用不同的加热毁损方式，如下：
①、Ⅰ组(阻断入肝血流组)：再分为以下各组进行毁损。Ⅰ-A组：单纯射频单相式加热组(单相加热方式指射频时初始功率为20W，以后每一分钟增加10W，直至90W，当阻抗达到最高时，其功率会自动下降至10W以下，即完成一个点的毁损消融)。Ⅰ-B组：单纯射频双相式加热组(双相加热是指在单相毁损完成30秒后再以60W作为初始功率重复毁损，两次毁损结束即为完成一个点的毁损消融)。Ⅰ-C组：射频联合多齿针无水酒精注射单相式加热组。Ⅰ-D组：射频联合多齿针无水酒精注射双相式加热组。
②、Ⅱ组(不阻断入肝血流组)：与Ⅰ组一样，分别按Ⅱ-A组、Ⅱ-B组、Ⅱ-C组、Ⅱ-D组四种情况进行毁损。
每只猪肝脏均选择4个肝叶进行毁损处理，每1肝叶毁损1处。毁损点均尽量远离大血管及胆管，以减少其对实验的影响。阻断入肝血流时采用无损伤钳对被毁损肝叶血流进行阻断。射频联合多齿针无水酒精注射时，当多齿针每推进1cm时注射无水酒精为1ml，注射完5ml后将子针回缩再旋转母针60°重复注射，即每个毁损点注射酒精剂量均为10毫升，注射完后退出多齿针，换用射频针进行同部位射频毁损，射频针和多齿针由同一针鞘引导，以使二者能作用于同一部位。记录每次射频毁损的时间及达到最高阻抗时相应功率值。毁损结束后均即刻将猪处死，取出肝脏，观察肉眼变化，每个毁损灶沿着射频针道方向切开，观察肝脏及毁损灶形态、颜色变化、测量毁损灶的大小(最长直径)，测量尺精确度为1mm。分别在毁损点的中心、边缘(为肉眼所见的毁损组织与正常组织交界处)、旁1cm(即距边缘处外侧旁1cm)处取材送病理检查，观察组织病理学变化情况。
3.观察指标及数据处理3.1.记录每次射频毁损的时间及达到最高阻抗时相应功率值。
3.2.观察毁损灶形态、颜色等变化，并测量其毁损范围的大小。
3.3.分别在每个毁损点的中心、边缘、旁1cm处取材送病理检查，观察毁损后组织病理学变化情况。
3.4.全部数据以均数±标准差(-x±s)表示，采用SPSS11.0软件包处理，组间比较用t检验，P＜0.05为差别有显著性意义。
结果1. 各组实验过程均顺利完成，没有出现干扰实验结果的意外事件。每只猪均完成4处毁损，总共为96处。每个毁损灶沿着射频针道方向切开，毁损灶可看到无明显分界的中央空心或炭化区，中间灰白区和边缘暗红充血带。充血带宽度约0.2～0.3cm，以此充血带为界测量毁损灶的大小。病理检查提示毁损灶中央均呈完全性坏死改变，边缘可见有大量组织细胞变性、亦有部分组织坏死，同时还可发现边缘处充血、出血、血管堵塞现象及炎性细胞浸润明显，旁1cm处有少量细胞变性和炎性细胞浸润，但未见有组织坏死。
2.Ⅰ-A组与Ⅰ-B组、Ⅰ-C与Ⅰ-D、Ⅱ-A与Ⅱ-B、Ⅱ-C与Ⅱ-D比较，后者均比前者所造成的组织毁损范围更大，即无论是在阻断血流或不阻断血流情况下，双相加热组的组织毁损范围较单相加热组的更大，其差异均具有显著性意义(P＜0.05)。
3.Ⅰ-A与Ⅰ-C、Ⅰ-B与Ⅰ-D比较，其造成的组织毁损范围差别不大，没有统计学意义(P＞0.05)。Ⅱ-A与Ⅱ-C、Ⅱ-B与Ⅱ-D比较，后者均比前者所造成的组织毁损范围大，其差别均具有显著性意义(P＜0.05)。
4.Ⅰ-A与Ⅱ-A、Ⅰ-B与Ⅱ-B比较，前者均比后者所造成的组织毁损范围大，其差别均具有显著性意义(P＜0.05)。但是，Ⅰ-C与Ⅱ-C、Ⅰ-D与Ⅱ-D比较，其造成的组织毁损范围差别不大，没有统计学意义(P＞0.05)。
5.Ⅰ-A与Ⅰ-C、Ⅱ-A与Ⅱ-C、Ⅱ-A与Ⅰ-A、Ⅱ-C与Ⅰ-C比较，后者完成一次射频毁损全过程的时间均较前者短，其差异均具有显著性意义(P＜0.05)。但其达到最高阻抗时的功率值均差别不大，无统计学意义(P＞0.05)。
结论1. 阻断入肝血流能可以使肝组织射频毁损范围增大，射频毁损时间缩短。
2.双相式加热同样可以提高射频毁损的范围。
3.射频联合多齿针无水酒精注射具有协同作用，可增大肝组织毁损范围，缩短射频毁损所需时间。但在阻断入肝血流时，这种协同作用不明显。