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目的:在胃祺饮能有效治疗慢性萎缩性胃炎伴癌前病变的基础上,进一步探讨其抗肿瘤作用。通过观察胃祺饮对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其进行拆方研究,筛选出胃祺饮中具有抗肿瘤作用的有效组分和单体,对它们的作用机制进行研究探讨,从而为临床更好的应用和推广胃祺饮提供实验依据。
方法:对胃祺饮组成药物进行生药鉴定后,对其及组分进行提取,通过HPLC-UV和GC-MS检测其化学成分。应用MTT法检测胃祺饮及其组分、单体对胃癌细胞AGS生长的影响;应用流式细胞仪检测药物对胃癌AGS细胞周期和细胞凋亡的影响;应用Hoechst33342/PI双染法测定药物对AGS凋亡和坏死的影响;Western blot法测定药物对胃癌细胞周期、凋亡相关蛋白表达的影响;比色法测定药物对肿瘤细胞Caspase3活性的影响;药物干预期间用显微镜观察细胞数量及形态学变化。
结果:胃祺饮全方醇提物、胃祺饮全方总挥发油、胃祺饮全方总多糖、胃祺饮全方总黄酮得率分别是11.23%、0.7%、3.3%、1.18%。胃祺饮全方醇提物能显著抑制胃癌细胞AGS的生长,并呈剂量和时间依赖性,能阻滞细胞周期于G2/M期,明显促进胃癌细胞的凋亡,显著增强Caspase3的活性,下调cyclin B1、p53的表达,上调cytochrome c和Bax的表达,对Bcl-2、Fas和Fas L表达影响不明显。胃祺饮全方总挥发油显著抑制胃癌细胞AGS的生长,阻滞细胞周期于G2/M期,能诱导细胞凋亡和部分坏死。挥发油中的莪术油能显著抑制细胞生长,随着干预时间和干预剂量的不同,分别阻滞细胞周期于S期、G2/M期和G0/G1期,能诱导细胞凋亡和部分坏死。胃祺饮全方总多糖对胃癌细胞生长的影响不明显。胃祺饮总黄酮苷和总黄酮苷元对胃癌细胞生长均有抑制作用,总黄酮苷元作用强于总黄酮苷。蒲公英萜醇能显著抑制AGS细胞的生长,阻滞细胞周期于G2/M期,显著诱导细胞凋亡,而乙酰蒲公英萜醇抑制AGS细胞生长的作用不如蒲公英萜醇。毛蕊异黄酮具有抗肿瘤活性,可以阻滞AGS细胞于S期和G2/M期,对细胞凋亡作用不明显,下调了cyclin B1、cyclin D1、cyclin E、p53、p21的表达。
结论:胃祺饮具有抗肿瘤作用,能够显著抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡。其有效组分有全方挥发油、全方总黄酮,而全方总多糖对细胞生长无明显抑制作用。全方挥发油中的莪术油对AGS细胞生长有较好的抑制作用。已筛选的有效单体为毛蕊异黄酮、蒲公英萜醇、乙酰蒲公英萜醇。胃祺饮及其组分和单体抑制增殖促进凋亡的机制可能与阻滞细胞周期、调节周期凋亡相关蛋白表达的表达和增强Caspase3的活性等有关。