论文部分内容阅读
目的：观察自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞形态及增殖；检测SHR血管平滑肌细胞中钙调磷酸酶（CaN）的活性；观察钙拮抗剂左旋氨氯地平干预对SHR血管平滑肌细胞增殖的抑制作用，探讨其与CaN的关系。方法：自发性高血压大鼠，雄性，周龄9周，体重质量190-210g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，测量大鼠尾巴根部血压示：收缩压170±12mmHg，舒张压98±7mmHg。无菌获取鼠主动脉，中膜制备，传代培养，实验分组：正常对照组（C组）、自发性高血压模型组(N组)，药物组：左旋氨氯地平低剂量组0.1umol/L（L组），中剂量组1.0umol/L（M组），高剂量组10.0umol/L（H组），采用免疫组化法鉴定VSMC，采用倒置相差显微镜观察VSMC形态、检测细胞成活率并绘制第2代细胞生长曲线， MTT法测各组VSMC增殖，ELISA法测定CaN活性的表达，数据分析用SPSS16.0统计软件处理。结果：1．免疫组化法鉴定VSMC：细胞的胞质或包膜出现浅黄色至深棕色染色颗粒，且排除背景非特异性染色，证明是血管平滑肌细胞。2.倒置相差显微镜观察VSMC形态、绘制第2代生长曲线并用台盼蓝染色法检测细胞成活率：光镜观察原代第3天左右即可见数个组织块周围出现细胞晕，第5-7天后，细胞分裂增殖进入对数生长期，第8天后，在组织块附近首次出现血管平滑肌细胞特征性的“谷-峰”结构；细胞成活率检测：存活细胞均在96%以上，表明培养的细胞传代成活率高；绘制生长曲线：细胞呈现“潜伏期-对数生长期-停滞期”的生长模式。3．MTT法测各组VSMC增殖及左旋氨氯地平干预对其的影响：对模型组与对照组重复测量数据进行球形检验，检验结果P<0.05，拒绝球形检验，需要ε校正系数来校正自由度，结果参照Greenhouse-Geisser。Greenhouse-Geisser结果显示：各个时间之间比较F=7.387，P=0.000，说明随时间的延长，细胞一直在增多；由轮廓图可见：到C组第6天，N组第5天细胞增殖达到最高值；C组与N组之间比较：F=3.678，P=0.000，表明两组之间细胞增殖趋势不同，对照组中VSMC的增殖较模型组呈缓慢增长趋势，说明模型组的增殖效果优于对照组；处理组与时间的交互作用：F=4.534，P=0.000，高血压与时间之间存在交互作用，说明它们共同影响细胞的增殖，高剂量的左旋氨氯地平对SHR的VSMC异常增殖的抑制作用明显（P<0.05）。4．ELISA法测定CaN活性的变化及左旋氨氯地平干预对其影响：N组CaN活性明显高于C组（5.22±0.34vs2.81±0.18，P<0.05），表明SHR的CaN活性升高；H组CaN活性明显低于N组（3.98±0.13vs5.22±0.34，P<0.05），表明高剂量的左旋氨氯地平在一定程度上能够降低SHR的CaN活性。结论：1.自发性高血压大鼠中CaN活性升高提示该酶参与血管平滑肌细胞增殖。2．左旋氨氯地平通过降低CaN的活性，参与抑制血管平滑肌细胞增殖。