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目的：
本课题以扶正透毒祛毒复方含药血清（以下均简称为含药血清）对人慢性粒细胞急变期白血病耐药细胞株K562/ADR(以下简称耐药细胞K562/ADR)进行处理，通过检测不同剂量含药血清对耐药细胞K562/ADR耐药率、增殖抑制、细胞内阿霉素(ADM)浓度以及P糖蛋白(P-gp)的影响，观察扶正透毒祛毒复方对K562/ADR耐药性的逆转效果，并探讨扶正透毒祛毒复方逆转K562/ADR对ADM耐药性的作用机制。
方法：
1.中药复方的制备：扶正扶正透毒祛毒中药复方由黄芪、党参、白术、青蒿、鳖甲、半枝莲、白花蛇舌草等组成，将其以常规方法水煎后制成浓度为1g/ml的药液，4℃保存备用。
2.含药兔血清的制备：将24只新西兰大白兔随机分为4组，即高、中、低剂量扶正透毒祛毒复方实验组及空白对照组，实验组连续用扶正透毒祛毒中药复方灌胃3天，空白对照组正常喂养。于末次灌胃后2h，在无菌条件下股动脉取血，分离血清，将同组内血清灭活后保存备用。空白组取血方法同实验组。
3.细胞培养：在37℃、5％CO2条件下培养细胞K562及K562/ADR，在K562/ADR培养体中加入ADM维持其耐药性，取对数生长期细胞，2～3d进行一次传代，并更换细胞培养液。
4.采用MTT法分别检测ADM对K562、K562/ADR的细胞毒作用，计算K562/ADR对ADM的耐药倍数;通过MTT法检测经不同剂量含药血清联合ADM干预后的细胞K562/ADR对ADM耐药性的逆转倍数，观察扶正透毒祛毒复方对K562/ADR的逆转效果;MTT法检测含药血清对细胞K562、K562/ADR的抑制率，以观察扶正透毒祛毒复方对细胞K562、K562/ADR增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测含药血清对耐药细胞K562/ADR内ADM荧光强度及P-gp表达的影响，以探讨扶正透毒祛毒复方逆转耐药的机制。
结果：
1.耐药细胞K562/ADR的耐药倍数：细胞K562、K562/ADR在不同浓度ADM的培养液中培养72h后，自动酶标仪检测细胞株K562的IC50(半数抑制浓度)值为0.681±0.04μg/ml，K562/ADR的IC50值为25.34±1.43μg/ml，耐药倍数(RF)=37.21，即K562/ADR的耐药倍数为37.21倍。
2.不同剂量含药血清对耐药细胞K562/ADR耐药倍数的影响：高剂量含药血清+ADM组(HD+ADM)逆转倍数为28.80倍;中剂量含药血清+ADM组(MD+ADM)逆转倍数为10.26倍;低剂量含药血清+ADM组(LD+ADM)逆转倍数为5.87倍。
3.不同剂量含药血清对细胞K562、K562/ADR抑制率的影响：不同剂量的含药血清均能够抑制K562、K562/ADR细胞的增殖，且抑制作用与剂量呈正相关，各组间比较均有显著统计学差异(P＜0.01）。
4.不同剂量含药血清对K562/ADR细胞中ADM蓄积浓度的影响：K562/ADR细胞内ADM的蓄积浓度在HD+ADM组中最高，在空白兔血清+ADM组(NS+ADM)中最低。各组耐药细胞内ADM的蓄积浓为：HD+ADM组＞干扰素+ADM组(IFN+ADM)＞MD+ADM组＞LD+ADM组＞NS+ADM组，HD+ADM组、MD+ADM组、LD+ADM组及IFN+ADM组与NS+ADM组比较均具有显著性差异(P＜0.01)，HD+ADM组分别与MD+ADM组、LD+ADM组比较均具有显著统计学差异(P＜0.01);LD+ADM组与IFN+ADM组比较有显著性差异(P＜0.01);MD+ADM组与IFN+ADM组、LD+ADM组组间比较具有统计学意义(P＜0.05)。
5.不同剂量含药血清对K562/ADR细胞中P-gp表达的影响：不同剂量的含药血清均能够降低P-gp的表达，且实验中各组在72h的P-gp表达率最低。各组P糖蛋白表达率为：HD+ADM组＜IFN+ADM组＜MD+ADM组＜LD+ADM组＜NS+ADM组。LD+ADM组、MD+ADM组、HD+ADM组、IFN+ADM组分别与NS+ADM组比较，均具有显著统计学差异(P＜0.01）;除MD+ADM租与IFN+ADM组比较无统计学意义(P＞0.05)外，HD+ADM组及LD+ADM组与IFN+ADM组比较统计学差异均显著(P＜0.01）。
结论：
(1)扶正透毒祛毒复方能够以剂量依赖方式逆转耐药细胞K562/ADR对ADM的耐药性;
(2)扶正透毒祛毒复方具有一定程度抑制K562、K562/ADR细胞增殖的作用;
(3)扶正透毒祛毒复方能够提高K562/ADR细胞内ADM的蓄积浓度，增强其对ADM的敏感性;
(4)扶正透毒祛毒复方能够逆转耐药细胞K562/ADR对ADM的耐药性，其机制可能与降低P-gp的表达有关。
本课题以扶正透毒祛毒复方含药血清（以下均简称为含药血清）对人慢性粒细胞急变期白血病耐药细胞株K562/ADR(以下简称耐药细胞K562/ADR)进行处理，通过检测不同剂量含药血清对耐药细胞K562/ADR耐药率、增殖抑制、细胞内阿霉素(ADM)浓度以及P糖蛋白(P-gp)的影响，观察扶正透毒祛毒复方对K562/ADR耐药性的逆转效果，并探讨扶正透毒祛毒复方逆转K562/ADR对ADM耐药性的作用机制。
方法：
1.中药复方的制备：扶正扶正透毒祛毒中药复方由黄芪、党参、白术、青蒿、鳖甲、半枝莲、白花蛇舌草等组成，将其以常规方法水煎后制成浓度为1g/ml的药液，4℃保存备用。
2.含药兔血清的制备：将24只新西兰大白兔随机分为4组，即高、中、低剂量扶正透毒祛毒复方实验组及空白对照组，实验组连续用扶正透毒祛毒中药复方灌胃3天，空白对照组正常喂养。于末次灌胃后2h，在无菌条件下股动脉取血，分离血清，将同组内血清灭活后保存备用。空白组取血方法同实验组。
3.细胞培养：在37℃、5％CO2条件下培养细胞K562及K562/ADR，在K562/ADR培养体中加入ADM维持其耐药性，取对数生长期细胞，2～3d进行一次传代，并更换细胞培养液。
4.采用MTT法分别检测ADM对K562、K562/ADR的细胞毒作用，计算K562/ADR对ADM的耐药倍数;通过MTT法检测经不同剂量含药血清联合ADM干预后的细胞K562/ADR对ADM耐药性的逆转倍数，观察扶正透毒祛毒复方对K562/ADR的逆转效果;MTT法检测含药血清对细胞K562、K562/ADR的抑制率，以观察扶正透毒祛毒复方对细胞K562、K562/ADR增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测含药血清对耐药细胞K562/ADR内ADM荧光强度及P-gp表达的影响，以探讨扶正透毒祛毒复方逆转耐药的机制。
结果：
1.耐药细胞K562/ADR的耐药倍数：细胞K562、K562/ADR在不同浓度ADM的培养液中培养72h后，自动酶标仪检测细胞株K562的IC50(半数抑制浓度)值为0.681±0.04μg/ml，K562/ADR的IC50值为25.34±1.43μg/ml，耐药倍数(RF)=37.21，即K562/ADR的耐药倍数为37.21倍。
2.不同剂量含药血清对耐药细胞K562/ADR耐药倍数的影响：高剂量含药血清+ADM组(HD+ADM)逆转倍数为28.80倍;中剂量含药血清+ADM组(MD+ADM)逆转倍数为10.26倍;低剂量含药血清+ADM组(LD+ADM)逆转倍数为5.87倍。
3.不同剂量含药血清对细胞K562、K562/ADR抑制率的影响：不同剂量的含药血清均能够抑制K562、K562/ADR细胞的增殖，且抑制作用与剂量呈正相关，各组间比较均有显著统计学差异(P＜0.01）。
4.不同剂量含药血清对K562/ADR细胞中ADM蓄积浓度的影响：K562/ADR细胞内ADM的蓄积浓度在HD+ADM组中最高，在空白兔血清+ADM组(NS+ADM)中最低。各组耐药细胞内ADM的蓄积浓为：HD+ADM组＞干扰素+ADM组(IFN+ADM)＞MD+ADM组＞LD+ADM组＞NS+ADM组，HD+ADM组、MD+ADM组、LD+ADM组及IFN+ADM组与NS+ADM组比较均具有显著性差异(P＜0.01)，HD+ADM组分别与MD+ADM组、LD+ADM组比较均具有显著统计学差异(P＜0.01);LD+ADM组与IFN+ADM组比较有显著性差异(P＜0.01);MD+ADM组与IFN+ADM组、LD+ADM组组间比较具有统计学意义(P＜0.05)。
5.不同剂量含药血清对K562/ADR细胞中P-gp表达的影响：不同剂量的含药血清均能够降低P-gp的表达，且实验中各组在72h的P-gp表达率最低。各组P糖蛋白表达率为：HD+ADM组＜IFN+ADM组＜MD+ADM组＜LD+ADM组＜NS+ADM组。LD+ADM组、MD+ADM组、HD+ADM组、IFN+ADM组分别与NS+ADM组比较，均具有显著统计学差异(P＜0.01）;除MD+ADM租与IFN+ADM组比较无统计学意义(P＞0.05)外，HD+ADM组及LD+ADM组与IFN+ADM组比较统计学差异均显著(P＜0.01）。
结论：
(1)扶正透毒祛毒复方能够以剂量依赖方式逆转耐药细胞K562/ADR对ADM的耐药性;
(2)扶正透毒祛毒复方具有一定程度抑制K562、K562/ADR细胞增殖的作用;
(3)扶正透毒祛毒复方能够提高K562/ADR细胞内ADM的蓄积浓度，增强其对ADM的敏感性;
(4)扶正透毒祛毒复方能够逆转耐药细胞K562/ADR对ADM的耐药性，其机制可能与降低P-gp的表达有关。