【摘 要】
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Rab蛋白是小分子GTP结合蛋白家族(small GTP-binding proteins)Ras超家族中最大的亚家族,有大约80个成员。与Ras蛋白类似,Rab蛋白可以调节细胞分化,增殖,凋亡,DNA的复制与转
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Rab蛋白是小分子GTP结合蛋白家族(small GTP-binding proteins)Ras超家族中最大的亚家族,有大约80个成员。与Ras蛋白类似,Rab蛋白可以调节细胞分化,增殖,凋亡,DNA的复制与转录,组蛋白修饰和核小体装配以及细胞骨架的形成,主要依赖囊泡途径调节细胞内信号传导,从而在肿瘤的发展中起着重要作用。
部分Ras超家族成员如RhoA,Racl,Rap1B已证实会被泛素化修饰,但是目前对Rab家族泛素化调控方面的系统性研究还很少。
本文将人源的Rab家族成员分别克隆连入带有Flag标签的哺乳动物细胞表达载体中,测序鉴定并表达验证其正确性。至今己成功克隆出了62个Rab家族成员。同时,系统筛选检测了Rab家族成员的蛋白水平能否被Smurf1、Smurf2、Wwp2、Nedd4和Itch对这些C2-WW-HECT家族泛素连接酶成员影响,发现15个Rab家族成员的蛋白水平会C2-WW-HECT家族泛素连接酶的某些成员所调控。
此外,通过进一步研究Smurf1对RabSa蛋白水平的调控与其E3泛素连接酶活性是否相关、蛋白酶体抑制剂对其降解的抑制作用、Smurf1与RabSa在细胞内和体外条件下的相互作用以及体内体外泛素化情况等方面,证实了Smurf1可以直接与Rab5a结合泛素化调控RabSa,并且这种调控和Smurf1的E3活性相关。这种泛素化调控在RabSa参与的受体内化和非受体内化的信号通路,细胞骨架的运动和肿瘤细胞的分化迁移等功能中的生物学意义仍需要进一步探索。
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