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目的:“莪黄灌肠液”对结直肠癌SW480细胞HIF-1α、Bax、p53的影响。
方法:1.大鼠喂养:使用EXCEL软件对已编好号并生成相应数字的50只大鼠进行随机分组,分成5组,每组10只;在SPF环境中喂养一周,大鼠体重控制在(200加减20g)之间;按照《实验动物学》中,人体用药剂量和大鼠的用药剂量比例关系为6.25。莪黄灌肠液3.4g生药/ml,按照临床使用量,可计算出莪黄灌肠液高剂量组的浓度是24.3g/kg,中剂量组是12.15g/kg,低剂量组是6.075g/kg,氟尿嘧啶组(腹腔注射)0.025g/kg,阴性对照组(生理盐水)10g/kg。每天按规定时间对大鼠进行灌胃和腹腔注射,连续给药1周后,达到血药浓度最高值;末次给药2h后,严格按照外科无菌操作原则,经腹主动脉采血,提取各组的含药血清。2.细胞体外实验:体外结直肠癌SW480细胞,进行常规细胞培养、传代、计数、冻存,通过使用倒置显微镜对细胞状态进行详细观察并记录,对数生长期时含药血清干预每组细胞的培养;3.检测:①MTT法检测不同浓度组的细胞活性情况;②Caspase-3活性检测细胞凋亡的情况;③WesternBlot法检测细胞中HIF-1α/Bax/p53蛋白的表达;从而探讨莪黄灌肠液促进肿瘤细胞的凋亡。
结果:①MTT法检测了各组不同浓度的SW480细胞的活性,通过对比发现,莪黄灌肠液不同浓度组之间具有统计学意义(p<0.05);5-Fu组的抑制作用较莪黄灌肠液高、中、低组强,且有时间、浓度、剂量依赖性。②Caspase-3活性检测,我们发现,.随着各组浓度值的增加,Caspase-3的酶活性也在增加,不同浓度组之间的对比,差异有意义(p<0.05),与阴性对照组对比具有统计学意义(p<0.05).③WesternBlot方法进行检测,莪黄灌肠液抑制HIF-1α蛋白的表达,可促进Bax、p53蛋白的表达,莪黄灌肠液不同浓度组之间的对比具有统计学意义(p<0.05)与阴性对照组对比,差异明显(p<0.05)。
结论:莪黄灌肠液抑制人结直肠癌SW480细胞的活性;增加了Caspase-3酶活性;通过下调HIF-1α,上调Bax、p53蛋白,对细胞凋亡起到了促进作用,且有浓度依赖性。
方法:1.大鼠喂养:使用EXCEL软件对已编好号并生成相应数字的50只大鼠进行随机分组,分成5组,每组10只;在SPF环境中喂养一周,大鼠体重控制在(200加减20g)之间;按照《实验动物学》中,人体用药剂量和大鼠的用药剂量比例关系为6.25。莪黄灌肠液3.4g生药/ml,按照临床使用量,可计算出莪黄灌肠液高剂量组的浓度是24.3g/kg,中剂量组是12.15g/kg,低剂量组是6.075g/kg,氟尿嘧啶组(腹腔注射)0.025g/kg,阴性对照组(生理盐水)10g/kg。每天按规定时间对大鼠进行灌胃和腹腔注射,连续给药1周后,达到血药浓度最高值;末次给药2h后,严格按照外科无菌操作原则,经腹主动脉采血,提取各组的含药血清。2.细胞体外实验:体外结直肠癌SW480细胞,进行常规细胞培养、传代、计数、冻存,通过使用倒置显微镜对细胞状态进行详细观察并记录,对数生长期时含药血清干预每组细胞的培养;3.检测:①MTT法检测不同浓度组的细胞活性情况;②Caspase-3活性检测细胞凋亡的情况;③WesternBlot法检测细胞中HIF-1α/Bax/p53蛋白的表达;从而探讨莪黄灌肠液促进肿瘤细胞的凋亡。
结果:①MTT法检测了各组不同浓度的SW480细胞的活性,通过对比发现,莪黄灌肠液不同浓度组之间具有统计学意义(p<0.05);5-Fu组的抑制作用较莪黄灌肠液高、中、低组强,且有时间、浓度、剂量依赖性。②Caspase-3活性检测,我们发现,.随着各组浓度值的增加,Caspase-3的酶活性也在增加,不同浓度组之间的对比,差异有意义(p<0.05),与阴性对照组对比具有统计学意义(p<0.05).③WesternBlot方法进行检测,莪黄灌肠液抑制HIF-1α蛋白的表达,可促进Bax、p53蛋白的表达,莪黄灌肠液不同浓度组之间的对比具有统计学意义(p<0.05)与阴性对照组对比,差异明显(p<0.05)。
结论:莪黄灌肠液抑制人结直肠癌SW480细胞的活性;增加了Caspase-3酶活性;通过下调HIF-1α,上调Bax、p53蛋白,对细胞凋亡起到了促进作用,且有浓度依赖性。