论文部分内容阅读
目的：转录信号的转导子与激活子5(Signal Transducer and Activator ofTranscription-5，STAT5)是转录信号转导子与激活子家族的重要成员之一，广泛表达于不同类型的细胞和组织中，与许多肿瘤的发生、发展密切相关，然而在结直肠癌中STAT5的研究少见报道。本研究的主要目的是检测STAT5在结肠腺癌组织中的表达和活化情况，探讨其与结肠腺癌发生、发展、演进及与结肠癌患者预后之间的关系；研究siRNA介导的STAT5基因沉默对人结直肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制，为结直肠癌基因治疗提供理论基础和实验依据。
方法：应用免疫组织化学方法检测结肠腺癌组织标本中活化的STAT5(Phospho-STAT5，P-STAT5)及Cyclin D1的表达情况，并分析两者与各临床病理参数及总生存率的关系；利用western blot方法检测所选三种肿瘤细胞(LOVO、SW620及HCT116)的STAT5蛋白表达和磷酸化情况，检测STAT5siRNA干涉前后HCT116细胞中STAT5总蛋白表达、其磷酸化水平的表达、及P21、P27、Bcl-2、Cyclin D1、Survivin下游靶向因子表达水平变化情况；MTT法检测细胞增殖变化；Hoechst33258染色检测细胞凋亡形态学上的变化；Annexin V/PI复染结合流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡变化情况。
结果：P-STAT5和Cyclin D1的表达分别定位于细胞浆和细胞核，两者的表达呈正相关(r=0.250，P=0.001)；P-STAT5的表达与肿瘤浸润深度(P=0.002)及预后生存相关(P=0.002)；P-STAT5是结肠腺癌患者独立的预后判定指标(P=0.020)。所选几种肿瘤细胞中均可检测到STAT5蛋白的高表达及其磷酸化表达；STAT5siRNA转染后，HCT116细胞中P-STAT5、Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达水平降低，STAT5、Survivin蛋白表达水平未见明显变化，P21、P27蛋白表达水平升高；转染后24h肿瘤细胞即开始表现出一定的增殖抑制效应，48h表现出明显的抑制效应，但不能够完全抑制肿瘤细胞增殖；转染48h后，G0/G1期细胞比例由43.03％上升至65.63％，S期细胞由48.97％下降至29.05％，细胞周期阻滞于G0/G1期；转染48h后检测各组细胞凋亡率：空白组早期及晚期凋亡率为2.86％和2.02％，对照组为3.76％和2.01％，转染组为8.72％和12.51％，表明STAT5siRNA与HCT116细胞作用后能够促进细胞凋亡。
结论：P-STAT5在结肠腺癌组织中过表达，并与结肠腺癌的发生、发展及预后密切相关；P-STAT5可能是通过上调Cyclin D1表达，抑制细胞凋亡，促进细胞转化，诱导肿瘤形成；STAT5siRNA转染HCT116细胞可以抑制人结直肠癌细胞增殖，促进凋亡，提示STAT5在结直肠癌发生、发展中起重要作用，STAT5有望成为结直肠癌治疗新的分子靶标。