【摘 要】
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红豆越橘(Vaccinium vitis-idaea Linn.)属于杜鹃花科越橘属常绿灌木，是重要的小浆果果树之一。除了大量采集加工野生果实外，人工种植商业果园也已经得到发展。红豆越橘果实中富含花色苷等多种生物活性物质。除了利用它的果实制成果汁等多种加工品外，其植株具有耐旱性、耐寒性、叶片常绿和株型矮小等特点，也被应用在园林观赏方面。随着全球气候变暖、环境变化加剧和人为过度采集利用野生资源行为等
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红豆越橘(Vaccinium vitis-idaea Linn.)属于杜鹃花科越橘属常绿灌木，是重要的小浆果果树之一。除了大量采集加工野生果实外，人工种植商业果园也已经得到发展。红豆越橘果实中富含花色苷等多种生物活性物质。除了利用它的果实制成果汁等多种加工品外，其植株具有耐旱性、耐寒性、叶片常绿和株型矮小等特点，也被应用在园林观赏方面。随着全球气候变暖、环境变化加剧和人为过度采集利用野生资源行为等，包括红豆越橘植物在内很多生物种质资源的生存都受到了威胁，因此保护和保存种质资源任务迫在眉睫。在种质资源保存方法中，超低温保存法具有诸多优点，如可以长期保存植物种质资源。目前该方法已在多个物种上开展研究或应用。本研究旨在确定小滴玻璃化超低温保存红豆越橘种质资源中的相关参数，为其种质资源保存提供一种有效方法。试验通过离体培养的?艾达?品种茎尖小滴玻璃化法测试了超低温保存过程中的低温驯化、加载时间、植物玻璃化保护液脱水时间、卸载时间和液氮保存时间，对红豆越橘4个品种(系)茎尖和叶片不定芽的广谱性进行了验证。获得的主要结果如下：
红豆越橘茎尖小滴玻璃化超低温保存的最佳程序为：剪取苗龄30d的组培苗带顶芽茎段，在WPM+0.5mg/LZT+30g/L蔗糖+7g/L琼脂培养基(SSM)上4℃与黑暗条件下炼苗25d；将剥取的长1.5～2mm茎尖在黑暗和25℃±2℃条件下用预培养基(WPM+0.3M蔗糖+7g/L琼脂)培养24h；室温下茎尖在加载液(WPM+2.0M甘油+1.0M蔗糖)中处理30min；0℃下用PVS2溶液处理茎尖40min；0℃下在铝箔条上将茎尖与PVS2溶液制成小滴(2.5μL)，并迅速投入液氮(?196℃)中保存1h；从液氮中取出带茎尖的铝箔条迅速转入卸载液(WPM+1.2M蔗糖)中，室温下解冻和卸载20min；将卸载的茎尖在SSM培养基上黑暗培养(25℃±2℃)1d；之后在正常光照条件下再生培养。
四种基因型验证结果表明，4份种质资源的茎尖平均再生率为76%，叶片诱导培养3周左右的带有不定芽的小叶块(2-3mm×2-3mm)保存后再生率为100%。小滴玻璃化处理后的红豆越橘茎尖(未进行低温驯化)在液氮中保存30~90d平均再生率32.5%。
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