注射用丹参多酚酸对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

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背景:在脑缺血再灌注损伤过程中,过氧化物的过量产生与其引起的微循环障碍被认为是脑缺血再灌注损伤的最重要的病理生理基础。以往对于脑缺血再灌注治疗的研究主要集中于对过氧化物的清除,而非从源头上抑制其产生,以致于在药物起效前氧化损伤已经发生。本实验着眼于对脑缺血再灌注过程中过氧化物产生的主要源头之一NADPH氧化酶系统的调控。通过使用具有抗氧化作用的新药——注射用丹参多酚酸(TSI)作为干扰因素在再灌注初期给药进行治疗,模拟临床溶栓后血运再通的情况,观察该药物对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对NADPH氧化酶活性的调节作用,并进一步探究其作用机制。  目的:观察TSI在脑缺血再灌注引起的脑微循环障碍及神经元损伤中的作用并探究其相应的作用机制。  方法:雄性SD大鼠,体重280±10 g,行右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血60分钟,再灌注24小时,再灌注开始前2分钟给药。在再灌注24小时后通过正置微循环观察系统观察鼠软脑膜静脉中过氧化物产生、白细胞粘附及白蛋白渗出情况。通过神经功能评分、TTC染色、脑水含量测定、尼氏染色、TUNEL染色及MDA含量测定评价神经元的损伤情况。通过Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax,活化的caspase-3,NADPH亚基p47phox,p67phox,gp91phox以及AMPK/Akt/PKC的表达量。  结果: TSI可减轻大鼠大脑中动脉缺血再灌注引起的脑微循环障碍和神经元损伤,可抑制NADPH胞浆亚基p47phox,p67phox的膜转位及胞膜亚基gp91phox的增加,可激活AMPK,抑制Akt的磷酸化及PKC的转位。  结论:1.TSI可减轻脑缺血再灌注引起的神经功能损伤,减小脑梗死面积;2.TSI可改善脑缺血再灌注引起的脑微循环障碍;3.TSI可通过调节AMPK/Akt/PKC相关通路抑制脑缺血再灌注后NADPH氧化酶的激活。本实验结果为TSI临床上作为溶栓治疗的辅助方案提供了实验证据支持。
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