芪术泄浊方改善尿酸性肾病肾脏纤维化的机制研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xujiaaiwu
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目的:研究芪术泄浊方对尿酸性肾病大鼠尿酸水平、肾功能以及肾脏纤维化的作用,并初步探究可能的作用机制。  方法:1、用腺嘌呤(100 mg/Kg)和氧嗪酸钾(300 mg/Kg)给Wistar大鼠灌胃3周建立尿酸性肾病模型,造模同时予别嘌醇和芪术泄浊方药物干预。2、实验第21天,将大鼠麻醉处死后取血,分离血清,用于测定血尿酸、胱抑素水平;分离大鼠肝脏检测肝脏黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)活性。3、分离大鼠左侧肾脏于多聚甲醛中固定行HE染色、Masson染色,光镜下观察肾脏中有无结晶,肾小管有无损伤以及间质胶原纤维的分布情况,行免疫组化观察钙粘附蛋白E和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在肾脏中的表达分布情况;取右侧肾脏保存于深低温冰箱,提取肾脏蛋白行Western-blot检测纤维粘连蛋白、Ⅲ型胶原观察肾脏中细胞外基质的表达情况,检查钙粘附蛋白E和α-SMA、Snail、Slug还有Twist含量观察肾脏表型转化的情况。  结果:  1、实验第21天,正常组大鼠毛色富有光泽,活动灵敏,精神充沛;尿酸性肾病大鼠的毛色黯淡,缺乏光泽,活动减少,精神不振;别嘌醇组和芪术泄浊方组大鼠的上述状态较模型组有所好转。  2、模型组大鼠血尿酸、胱抑素较正常组有所升高,别嘌醇组和芪术泄浊方组大鼠血清尿酸均低于模型组。芪术泄浊方组大鼠血清胱抑素水平比模型组低,别嘌醇组的血清胱抑素水平与模型组相比无明显统计学差异。  3、HE染色切片显示模型组大鼠肾小管间质有炎性细胞浸润,伴有肾小管扩张和黄褐色结晶沉积,别嘌醇和芪术泄浊方组未观察到明显炎性细胞浸润和黄褐色结晶物,有少量的肾小管扩张,程度较模型组轻。  4、模型组的肝脏组织中黄嘌呤氧化酶活性比正常组升高,别嘌醇和芪术泄浊方组大鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性水平比模型组降低。  5、Masson染色显示模型组大鼠肾脏切片中可观察到肾小管萎缩,间质区域有胶原纤维积聚,芪术泄浊方组大鼠肾脏损害与胶原分布与模型组相比有所改善。 Western blot结果显示模型组的肾脏纤维粘连蛋白和Ⅲ型胶原的分泌水平均高于正常组,芪术泄浊方组大鼠的肾脏纤维粘连蛋白和Ⅲ型胶原的水平低于模型组。  6、Western blot结果显示模型组大鼠肾脏中钙粘附蛋白E表达低于正常组而α-SMA表达高于正常组,芪术泄浊方组大鼠肾脏中钙粘附蛋白E表达高于模型组而α-SMA表达低于模型组。模型组大鼠肾脏中Slug、Snail、Twist蛋白表达高于正常组,芪术泄浊方组大鼠肾脏的上述蛋白的表达低于模型组。  结论:芪术泄浊方能降低尿酸性肾病大鼠的血清尿酸、胱抑素水平,抑制肾脏间质炎性细胞的浸润并缓解肾脏纤维化进程,显示出对肾功能的保护作用。其作用机制可能与抑制尿酸性肾病大鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活性、抑制肾小管细胞发生EMT有关。
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