紫苏粕提取物的抗氧化与保肝作用研究

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紫苏籽榨油后的残渣(紫苏粕)中含有丰富的多酚类物质,主要包括迷迭香酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、咖啡酸以及咖啡酸-3-O-葡萄糖苷等。研究表明,这些多酚类物质具有显著的抗氧化活性,可以消除多种自由基,对自由基诱导产生的肝损伤等疾病具有潜在的干预作用。本课题拟通过比较迷迭香酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、咖啡酸以及咖啡酸-3-O-葡萄糖苷四个单体成分的ABTS、DPPH自由基清除活性及FRAP抗氧化活性,明确四个主要单体成分抗氧化活性的相对强弱,并通过H2O2诱导的HepG2肝细胞损伤模型评价其对肝细胞损伤的保护作用,确定活性最好的化合物;在此基础上,通过响应面设计方法优化其提取、富集工艺,并对其肝细胞损伤的保护机制进行研究。本论文研究结果如下:  (1)通过比较迷迭香酸、迷迭香酸-3-O-葡萄糖苷、咖啡酸以及咖啡酸-3-O-葡萄糖苷等四种单体化合物DPPH、ABTS自由基清除能力和FRAP还原力等体外抗氧化活性,以及对H2O2诱导的HepG2肝细胞的保护作用,确定迷迭香酸在四种单体化合物中抗氧化活性最强,对H2O2诱导的HepG2肝细胞损伤的保护作用最好,是紫苏粕中的主要功效成分;  (2)通过单因素实验考察了提取时间、提取温度和硫酸浓度对酸水解工艺提取迷迭香酸提取率的影响,进而通过响应面分析得到了迷迭香酸的最佳提取工艺条件为:硫酸水溶液浓度8.0%,温度90℃,时间1.5 h,提取得到的迷迭香酸提取率为0.541±0.02 mg/g DW;  (3)通过比较8种大孔树脂对紫苏粕中迷迭香酸的静态吸附与解析特性,筛选出HPD200A型大孔树脂作为迷迭香酸的富集载体;通过动态吸附与解吸附实验,最终建立迷迭香酸的最佳富集工艺条件为:洗脱溶剂为60%乙醇,流速为2.0 mL/min,洗脱液用量为2 BV;最终得到的提取物中迷迭香酸的含量为26.8%;  (4)通过MTT实验、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞技术检测和qRT-PCR检测,发现富含迷迭香酸的紫苏粕提取物在12.5和25.0μg/mL浓度下可以显著抑制H2O2诱导的HepG2细胞的氧化损伤,降低细胞凋亡的比例,并能够调节Bcl-2/Bax、Casepase-3和Casepase-9 mRNA的表达水平。  本研究为紫苏粕资源的深入开发与利用提供了新的方向,也提供了一种具有潜在保肝活性的天然提取物资源。
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