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川贝母（Fritillariae Cirrhosae Bulbus）是一种多基原植物，来源于百合科植物川贝母（Fritillaria cirrhosa）、甘肃贝母（F.przewalskii）、梭砂贝母（F.delavayi）、暗紫贝母（F.unibracteata）、太白贝母（F.taipaiensis）和瓦布贝母（F.unibracteata var.wabuensi）的干燥鳞茎，是我国重要的传统中药材，具有清热润肺、止咳化痰、散结消肿的功效，被称为“润肺圣药”。在贝母类药材中，川贝母疗效好，毒副作用小，但其生长周期长、资源短缺、市场需求不断增长以及具有高的药用价值，导致无法满足临床需求，致使市场上该品种的伪品“以次充好”的情况比较严重，严重影响了川贝母的疗效和用药安全性。因此建立快速、便捷、操作性强的川贝母及其混伪品的鉴别方法，对中药材市场的监管及中医中药的健康发展具有重要的现实意义。
目前已有多种方法对贝母类药材进行检测，但其中多数方法操作繁琐、时间长、存在被污染的风险、无法进行混合样品的鉴定或是检测结果模棱两可。本研究利用多重连接探针扩增（MLPA）技术高效、特异、敏感等优势，结合高分辨率熔解曲线法，以川贝母及其常见混伪品浙贝母（F.thunbergii bulbus）、湖北贝母（F.hupehensis bulbus）、平贝母（F.ussuriensis bulbus）、伊贝母（F.pallidiflorae bulbus）为研究对象，分别对其ITS1序列设计MLPA探针对，经MLPA-HRM试验变性、杂交、连接、实时荧光扩增及熔解过程后，通过高分辨率熔解曲线（HRM）图进行结果判定。应用此方法对五个物种对照药材进行了探针特异性、灵敏度、重复性试验，且对不同比例的川贝母及其常见伪品伊贝母的混合对照药材进行了检测。结果显示MLPA-HRM法可同时检测川贝母、浙贝母、湖北贝母、平贝母和伊贝母，且本研究设计的探针特异性良好，单一探针、混合探针在一个体系中均只能与相应物种杂交，产生特定物种的熔解曲线图谱，无非特异性峰；灵敏度高，MLPA-HRM对川贝母药材的最低检出限为0.19ng（DNA水平），对常见伪品伊贝母药材的最低检出限为1.3ng（DNA水平）;重复性好，理论上，结果的重现性取决于DNA样本纯度的质量与反应体系的混合程度，一般可以保证;且此方法可以检测混合样品，当常见伪品伊贝母的比例为10%或更高时，熔解曲线图谱会出现归属于川贝母与伊贝母的双峰。
利用本研究建立的方法，我们检测了70份从各药材流通市场收集到的贝母类药材，经MLPA-HRM法检测到43份样品为川贝母药材，9份样品存在掺伪，18份样品为非川贝母药材。而应用PCR-RFLP法进行平行实验，鉴定结果为川贝母药材52份，非川贝母药材18份，此方法无法检出掺伪样品，MLPA-HRM法刚好可以弥补这方面的不足。进一步扩大MLPA-HRM法的适用范围，成功的将此方法应用到了16批贝母类药材原粉入药的中成药检测中，且其他药材对实验结果无干扰。结果显示，11批蛇胆川贝散药品中，9批为川贝母药材入药，2批存在掺伪；4批复方贝母片中贝母类药材为非川贝母；1批复方贝母氯化铵片中，贝母类药材为正品川贝母。与中药材检测结果相似，PCR-RFLP法无法鉴定中成药中川贝母药材是否被掺入了另一种贝母类药材,其他结果一致。与PCR-RFLP法进行对比，本研究建立的方法可以更快速的对中成药进行检测，更有效率、信息化的监控药品的用药安全。
综上所述，MLPA-HRM法可用于市场川贝母药材、贝母类药材原粉入药中成药中川贝母药材的掺伪控制。此外，可以通过对该方法的改进，应用于其他药材品种的鉴定中。
目前已有多种方法对贝母类药材进行检测，但其中多数方法操作繁琐、时间长、存在被污染的风险、无法进行混合样品的鉴定或是检测结果模棱两可。本研究利用多重连接探针扩增（MLPA）技术高效、特异、敏感等优势，结合高分辨率熔解曲线法，以川贝母及其常见混伪品浙贝母（F.thunbergii bulbus）、湖北贝母（F.hupehensis bulbus）、平贝母（F.ussuriensis bulbus）、伊贝母（F.pallidiflorae bulbus）为研究对象，分别对其ITS1序列设计MLPA探针对，经MLPA-HRM试验变性、杂交、连接、实时荧光扩增及熔解过程后，通过高分辨率熔解曲线（HRM）图进行结果判定。应用此方法对五个物种对照药材进行了探针特异性、灵敏度、重复性试验，且对不同比例的川贝母及其常见伪品伊贝母的混合对照药材进行了检测。结果显示MLPA-HRM法可同时检测川贝母、浙贝母、湖北贝母、平贝母和伊贝母，且本研究设计的探针特异性良好，单一探针、混合探针在一个体系中均只能与相应物种杂交，产生特定物种的熔解曲线图谱，无非特异性峰；灵敏度高，MLPA-HRM对川贝母药材的最低检出限为0.19ng（DNA水平），对常见伪品伊贝母药材的最低检出限为1.3ng（DNA水平）;重复性好，理论上，结果的重现性取决于DNA样本纯度的质量与反应体系的混合程度，一般可以保证;且此方法可以检测混合样品，当常见伪品伊贝母的比例为10%或更高时，熔解曲线图谱会出现归属于川贝母与伊贝母的双峰。
利用本研究建立的方法，我们检测了70份从各药材流通市场收集到的贝母类药材，经MLPA-HRM法检测到43份样品为川贝母药材，9份样品存在掺伪，18份样品为非川贝母药材。而应用PCR-RFLP法进行平行实验，鉴定结果为川贝母药材52份，非川贝母药材18份，此方法无法检出掺伪样品，MLPA-HRM法刚好可以弥补这方面的不足。进一步扩大MLPA-HRM法的适用范围，成功的将此方法应用到了16批贝母类药材原粉入药的中成药检测中，且其他药材对实验结果无干扰。结果显示，11批蛇胆川贝散药品中，9批为川贝母药材入药，2批存在掺伪；4批复方贝母片中贝母类药材为非川贝母；1批复方贝母氯化铵片中，贝母类药材为正品川贝母。与中药材检测结果相似，PCR-RFLP法无法鉴定中成药中川贝母药材是否被掺入了另一种贝母类药材,其他结果一致。与PCR-RFLP法进行对比，本研究建立的方法可以更快速的对中成药进行检测，更有效率、信息化的监控药品的用药安全。
综上所述，MLPA-HRM法可用于市场川贝母药材、贝母类药材原粉入药中成药中川贝母药材的掺伪控制。此外，可以通过对该方法的改进，应用于其他药材品种的鉴定中。