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背景：
卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，发生机制及病因学尚未明确。近年来，随着肿瘤微环境在癌症发生和发展认识的加深，人们对于肿瘤免疫逃逸机制的探讨成为该领域前沿课题。作为肿瘤免疫效应阶段的执行场所，肿瘤微环境内存在许多因素参与肿瘤组织与免疫系统的相互作用，其中免疫检查点分子PD-1通过与其负性调控受体PD-L1结合，可抑制T细胞的增殖、细胞因子的分泌，使T细胞功能失活，在肿瘤免疫逃逸过程发挥着极为重要的作用。因此靶向阻断PD-1/PD-L1免疫调节轴的癌症免疫疗法具有潜在的、巨大的临床治疗价值。目前PD-1/PD-L1单抗，已被批准用于治疗特定类型的肿瘤并获得良好的临床疗效。但对于卵巢癌这样的低免疫原性的肿瘤，单一抗PD-1/PD-L1抗体的应答率仅为10%—15%，且全身用药，可诱发全身多器官免疫反应，副作用较多。
最近的报道显示，一些化疗药物如吉西他滨(gemcitabine，GEM)可以促进肿瘤抗原递呈，改善免疫抑制的肿瘤微环境，提高肿瘤对免疫治疗的响应率。由于化疗药物及免疫治疗全身用药，全身毒性作用明显，是否可以采用局部给药的方式？递送载体和可降解的活性氧水凝胶生物支架越来越多地被认为是用于递送、持续释放免疫治疗的有效方式，其还有降低药物产生的全身毒性的作用。那么我们能否以PD-1为靶点，用凝胶递送GEM和PD-1抗体进入肿瘤免疫微环境，GEM进入免疫微环境后能否有效诱发免疫原性的肿瘤表型，增强PD-1抗体的抗肿瘤作用？这些问题都有待探索，本课题将就此展开研究。
目的：
本文以免疫检查点分子PD-1为靶分子，以肿瘤微环境为切入点，使用生物凝胶载体递送具有诱发肿瘤免疫原性的吉西他滨联合PD-1抗体治疗小鼠上皮性卵巢癌，借助组织学、细胞生物学、免疫学、动物学手段，探讨阻断该分子介导的肿瘤免疫逃逸，为卵巢癌的免疫治疗带来新的思路。
方法：
1．运用有机化学合成并制作医用递送药物的载体，并验证其生物学特性；
2．使用携带荧光素酶的阴性对照病毒感染ID8细胞，建立稳定表达荧光素酶ID8-luc细胞系，并进行验证；
3．建立ID8-luc小鼠上皮性卵巢癌皮下荷瘤模型，利用凝胶载体荷载不同药物对肿瘤进行治疗，观察联合治疗策略对肿瘤生长的影响；
4．使用免疫组化对肿瘤组织中PD-L1、CD4+和CD8+T细胞进行染色，分析PD-L1、CD4+和CD8+T细胞与不同治疗策略的关系；
5．过定量ELISA实验检测血浆中细胞因子水平，观察并分析给药后是否会引发小鼠全身性免疫反应；
6.利用生物发光成像、肿瘤体积测量验证凝胶载体荷载吉西他滨和PD-1抗体对肿瘤生长的影响；
7.使用远处种植肿瘤和局部肿瘤切除模型模拟远处肿瘤和术后复发模型，探索联合治疗策略对小鼠转移和复发的影响。
结果：
1．运用有机化学合成了活性氧水凝胶支架，具有将GEM和aPD-1次序释放的特性。
2．生物发光成像验证了稳定表达荧光素酶ID8-luc细胞系。
3．局部凝胶荷载GEM可诱发PD-L1在肿瘤细胞表达比例增加，引起肿瘤浸润淋巴细胞(CD4+/CD8+T细胞)在肿瘤组织的浸润数量增加。
4．局部凝胶荷载GEM还可减少免疫抑制细胞TAMs和MDSCs的数量。
5．通过定量ELISA实验检测血浆中细胞因子水平，结果表明局部肿瘤细胞产生的抗肿瘤细胞因子可诱发全身的抗肿瘤反应。
6．利用生物发光成像、肿瘤体积测量等结果显示，水凝胶荷载GEM和aPD-1局部联合治疗可明显抑制肿瘤生长。
7．水凝胶荷载GEM和aPD-1局部联合治疗对远处肿瘤和肿瘤切除术后复发有抑制作用。
结论：
1．局部水凝胶支架荷载GEM可诱发低免疫原性肿瘤的免疫表型，水凝胶支架荷载GEM和aPD-1可明显抑制肿瘤生长，对肿瘤复发和转移有抑制作用。
2．运用有机化学合成并成功制做了活性氧可降解的水凝胶支架，可荷载GEM和aPD-1，并在肿瘤部位次序释放药物。
3．治疗过程中小鼠无脱毛、体重减轻、器官损伤等毒性反应，可被机体耐受，在体治疗安全性良好。
卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，发生机制及病因学尚未明确。近年来，随着肿瘤微环境在癌症发生和发展认识的加深，人们对于肿瘤免疫逃逸机制的探讨成为该领域前沿课题。作为肿瘤免疫效应阶段的执行场所，肿瘤微环境内存在许多因素参与肿瘤组织与免疫系统的相互作用，其中免疫检查点分子PD-1通过与其负性调控受体PD-L1结合，可抑制T细胞的增殖、细胞因子的分泌，使T细胞功能失活，在肿瘤免疫逃逸过程发挥着极为重要的作用。因此靶向阻断PD-1/PD-L1免疫调节轴的癌症免疫疗法具有潜在的、巨大的临床治疗价值。目前PD-1/PD-L1单抗，已被批准用于治疗特定类型的肿瘤并获得良好的临床疗效。但对于卵巢癌这样的低免疫原性的肿瘤，单一抗PD-1/PD-L1抗体的应答率仅为10%—15%，且全身用药，可诱发全身多器官免疫反应，副作用较多。
最近的报道显示，一些化疗药物如吉西他滨(gemcitabine，GEM)可以促进肿瘤抗原递呈，改善免疫抑制的肿瘤微环境，提高肿瘤对免疫治疗的响应率。由于化疗药物及免疫治疗全身用药，全身毒性作用明显，是否可以采用局部给药的方式？递送载体和可降解的活性氧水凝胶生物支架越来越多地被认为是用于递送、持续释放免疫治疗的有效方式，其还有降低药物产生的全身毒性的作用。那么我们能否以PD-1为靶点，用凝胶递送GEM和PD-1抗体进入肿瘤免疫微环境，GEM进入免疫微环境后能否有效诱发免疫原性的肿瘤表型，增强PD-1抗体的抗肿瘤作用？这些问题都有待探索，本课题将就此展开研究。
目的：
本文以免疫检查点分子PD-1为靶分子，以肿瘤微环境为切入点，使用生物凝胶载体递送具有诱发肿瘤免疫原性的吉西他滨联合PD-1抗体治疗小鼠上皮性卵巢癌，借助组织学、细胞生物学、免疫学、动物学手段，探讨阻断该分子介导的肿瘤免疫逃逸，为卵巢癌的免疫治疗带来新的思路。
方法：
1．运用有机化学合成并制作医用递送药物的载体，并验证其生物学特性；
2．使用携带荧光素酶的阴性对照病毒感染ID8细胞，建立稳定表达荧光素酶ID8-luc细胞系，并进行验证；
3．建立ID8-luc小鼠上皮性卵巢癌皮下荷瘤模型，利用凝胶载体荷载不同药物对肿瘤进行治疗，观察联合治疗策略对肿瘤生长的影响；
4．使用免疫组化对肿瘤组织中PD-L1、CD4+和CD8+T细胞进行染色，分析PD-L1、CD4+和CD8+T细胞与不同治疗策略的关系；
5．过定量ELISA实验检测血浆中细胞因子水平，观察并分析给药后是否会引发小鼠全身性免疫反应；
6.利用生物发光成像、肿瘤体积测量验证凝胶载体荷载吉西他滨和PD-1抗体对肿瘤生长的影响；
7.使用远处种植肿瘤和局部肿瘤切除模型模拟远处肿瘤和术后复发模型，探索联合治疗策略对小鼠转移和复发的影响。
结果：
1．运用有机化学合成了活性氧水凝胶支架，具有将GEM和aPD-1次序释放的特性。
2．生物发光成像验证了稳定表达荧光素酶ID8-luc细胞系。
3．局部凝胶荷载GEM可诱发PD-L1在肿瘤细胞表达比例增加，引起肿瘤浸润淋巴细胞(CD4+/CD8+T细胞)在肿瘤组织的浸润数量增加。
4．局部凝胶荷载GEM还可减少免疫抑制细胞TAMs和MDSCs的数量。
5．通过定量ELISA实验检测血浆中细胞因子水平，结果表明局部肿瘤细胞产生的抗肿瘤细胞因子可诱发全身的抗肿瘤反应。
6．利用生物发光成像、肿瘤体积测量等结果显示，水凝胶荷载GEM和aPD-1局部联合治疗可明显抑制肿瘤生长。
7．水凝胶荷载GEM和aPD-1局部联合治疗对远处肿瘤和肿瘤切除术后复发有抑制作用。
结论：
1．局部水凝胶支架荷载GEM可诱发低免疫原性肿瘤的免疫表型，水凝胶支架荷载GEM和aPD-1可明显抑制肿瘤生长，对肿瘤复发和转移有抑制作用。
2．运用有机化学合成并成功制做了活性氧可降解的水凝胶支架，可荷载GEM和aPD-1，并在肿瘤部位次序释放药物。
3．治疗过程中小鼠无脱毛、体重减轻、器官损伤等毒性反应，可被机体耐受，在体治疗安全性良好。