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目的: 1.理论研究:为温胆片的临床运用和实验研究打下了坚实的理论基础。 2.临床运用:总结导师运用温胆片辨证施治的临床疗效并挖掘导师运用温胆片治疗焦虑症的疗效和特点。 3.实验研究:观察温胆片对焦虑模型大、小鼠的干预作用,评价温胆片对模型大鼠海马组织单胺类神经递质5-HT、NE及DA含量变化、大鼠血清皮质酮浓度及海马IL-1β、TNF-α表达的影响,初步探讨温胆片抗焦虑作用的机制。 方法: 1.理论研究:参考国内外众多文献。从焦虑症的流行病学、病因学、病理生理学、临床病程、诊断及鉴别诊断、药物和非药物的治疗等方面,了解国内外研究焦虑症的最新进展;探讨了中医对焦虑症的病名、病因病机及治疗的认识,阐明焦虑症的中医研究现状;系统整理温胆汤的来源、组成、功效及主治,温胆汤的临床运用,温胆汤临床治疗的疾病种类及特点,温胆片与温胆汤的关系,温胆汤和温胆片的现代实验研究进展。 2.临床运用:收集导师运用温胆片治疗焦虑症的门诊病历33例,观察其疗效。采用自身前后对照,以温胆片汤为基本方,其方组成为:竹茹10g,枳实10g,法半夏10g,陈皮5g,茯苓15g,甘草6g,郁金15g。并根据证型、患者个别症状与病情需要加减用药。先服用温胆片汤汤剂1周,症状减轻后用温胆片巩固疗效。温胆片,口服,每次4片,每日三次。共服用2月。采用统一表格记录患者用药前后的心烦意乱、忧虑不安、失眠或多梦、胸闷、心悸(自我感觉心慌心跳)、汗出、口干口苦、舌象及脉象等。主要采用中医证侯疗效评定标准。观察患者治疗前后症状改善情况、中医症候疗效和不良反应三个方面。 3.实验研究:(1)小鼠高架十字迷宫实验:健康雄性昆明种小白鼠50只,SPF级别,随机分为5组,即空白组、西药对照组(以下简称西药组)、温胆片低剂量组(以下简称温低组)、温胆片中剂量组(以下简称温中组)及温胆片高剂量组(以下简称温高组)。每组10只。给药,均按0.2ml/10g体重灌胃,其中温低组、温中组和温高组,分别给药小鼠浓度为0.045g/ml、0.090g/ml及0.180g/ml温胆片混悬液,西药组给浓度0.075mg/ml的等容积地西泮混悬液,空白组灌服等容积的生理盐水。各组连续给药10天,采用小鼠高架十字迷宫装置做行为测试。(2)大鼠空瓶刺激实验:SPF级SD雄性大鼠60只,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、温胆片组低剂量组、温胆片中剂量组、温胆片高剂量组(以下分别简称空白组、模型组、西药组、温低组、温中组、温高组)。每组大鼠分两笼喂养,即每笼喂养5只大鼠,方便大鼠饮水和观察行为。首先,各组大鼠给予1周适应期。在适应期间各组大鼠自由进食饮水。经过1周适应期后,进行定时喂水训练1周。定时喂水训练为每日2次,即每天早9:00~9:10和晚21:00~21:10饮水,其余时间撤去水瓶不给水。定时喂水期结束后开始应激实验,在上述2个时间段内给予不确定空瓶刺激,共3周。具体方法为:在定时喂水期间给予除空白组外各组大鼠空瓶刺激诱发其情绪应激,一天一次,早或晚,刺激的给予是无规律的。情绪刺激1周后开始给药。空白组和模型组每日给予按1ml/100g体重双蒸水灌胃,西药组每日按1ml/100g体重灌服浓度为0.100mg/ml地西泮的混悬液,温低组、温中组和温高组每日按1ml/100g体重灌胃相应浓度为0.060g/ml、0.120g/ml及0.240g/ml的温胆片混悬液。连续给药2周。给药1周后,开始观察在空瓶刺激10分钟内大鼠的行为次数。行为指标包括:攻击(咬或推撞空瓶和笼子),探究(前后左右的运动和光顾水瓶所在位置)以及修饰行为(梳理皮毛和洗脸)。共观察7天,取其平均值。末次给药1h后,用10%水合氯醛按3ml/kg体重腹腔注射麻醉。眼眶取全血放入真空抗凝管中,常规离心,取血清,采用双抗体夹心法测定大鼠血清皮质酮;并立即断头处死,迅速取出大脑于冰盘上快速分离出两侧海马,一侧海马放入无菌低温冻存管中,称海马的重量,加入预冷的5%过氯酸,超声匀浆,低温离心,取上清液,采用高效液相色谱仪检测大鼠海马组织的神经递质含量;另一侧海马放入10%福尔马林液固定,常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡切片用于免疫组化染色,观察海马IL-1β、TNF-α表达。 结果: 1.理论研究:焦虑症在中医中属于情志病、心病范畴,根据其症状和病因可归属到“惊”“恐”“惊悸”(心悸)“不寐”“火郁”“百合病”“脏躁”“奔豚病”等范畴。焦虑情绪与痰浊、火热的关系密切。其人善惊,惊者乃痰因火动也。 2.临床运用:(1)治疗后与治疗前的患者心烦意乱、忧虑不安、失眠或多梦、胸闷、心悸(自我感觉心慌心跳)、汗出、口干口苦及临床症状总积分有显著差异且有统计学意义。(2)共33例病例,治愈11例,显效18例,有效2例,无效2例,显愈率为87.88%,总有效率为93.94%。(3)患者在治疗过程中,未发生不良反应。 3.实验研究:(1)小鼠高架十字迷宫实验:与空白组比较,西药组、温低组、温中组及温高组的OE%、OT%均有增高的趋势,其中西药组和温高组有统计学意义。与空白组比较,西药组、温低组、温中组及温高组的RE值均有下降的趋势,其中西药组、温中组及温高组有统计学意义。(2)大鼠空瓶刺激实验:与空白组相比,模型组和各治疗组大鼠攻击、探究行为次数显著增加。与模型组相比,西药组、温低组、温中组和温高组大鼠攻击、探究行为次数均显著降低。空白组大鼠修饰行为次数明显高于模型组及各治疗组。模型组大鼠修饰行为次数明显低于空白组及各治疗组。(3)温胆片对焦虑症模型大鼠海马单胺类神经递质的影响:经治疗后,与模型组比,各治疗组5-HT、NE及DA含量均下降。与西药组比,温低组、温中组及温高组有差异但无统计学意义。温低组、温中组和温高组三组之间有差异但无统计学意义。(4)温胆片对焦虑症模型大鼠血清皮质酮及海马IL-1β、TNF-α表达的影响:与模型组相比,西药组及温低组的血清皮质酮值有所下降,差异不显著,温中组和温高组的血清皮质酮值下降差异极显著。光镜下,IL-1β主要在大鼠海马组织的海马足部位的分子层和椎体细胞层表达,主要为棕黄色颗粒,胞浆着色少数为细胞着色。与模型组相比,温低组、温中组、温高组及西药组IL-1β的平均光密度均降低且有显著差异,以温高组为佳。光镜下,TNF-α阳性反应为棕黄色颗粒,胞浆着色,主要分布在海马足部位。与模型组比,温低组、温中组和温高组TNF-α平均光密度均下降且有显著差异,以温高组为佳。 结论: 1.理论研究:焦虑情绪与痰浊、火热的关系密切,其人善惊,惊者乃痰因火动也。在古代,医家有运用温胆片治疗焦虑症的先例。 2.临床运用:导师从痰热论治焦虑症,符合焦虑症的中医病因病机,运用温胆片治疗焦虑症有效率高,不良反应少,可进一步探讨温胆片治疗焦虑症的机制。 3.实验研究:(1)温胆片使小鼠的OE%和 OT%值显著增加而具有抗焦虑作用,与地西泮的作用方向一致,且呈正性量效关系,以温胆片高剂量为优。(2)温胆片能显著降低焦虑模型大鼠的攻击行为次数而显示出抗焦虑作用,温胆片的低、中、高剂量中,以温胆片高剂量为佳。(3)温胆片低、中、高剂量组对焦虑模型大鼠海马组织的单胺类神经递质均有降低作用,推测温胆片抗焦虑症的作用机制可能与降低脑内海马组织单胺类神经递质的释放有关。(4)温胆片低、中、高剂量组均能使焦虑症大鼠的血清皮质酮浓度均有下降。我们推测,温胆片治疗焦虑症可能与调节糖皮质激素分泌有关。(5)温胆片低、中、高剂量组均使大鼠海马组织的IL-1β、TNF-α表达均降低,显示温胆片对IL-1β、TNF-α等细胞因子的表达有干预,我们推测,温胆片治疗焦虑症的机制可能与免疫系统调节相关。