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23F 型肺炎链球菌荚膜多糖重复单元中含有鼠李糖,由鼠李糖转移酶将二磷酸胸苷‐鼠李糖(dTD P‐Rha)转移到受体上完成.dTDP‐Rha 广泛存在于细菌中,其合成途径是抗菌药物潜在靶点.23F 型荚膜多糖合成基因簇中含有d‐TDP‐Rha 合成的四个基因,目前还没有生化证据支持其编码产物的功能.本研究旨在为dTDP‐Rha 合成第一步反应酶,胸苷转移酶(Cps23FL)的功能提供生化证据,并以酶法合成二磷酸胸苷葡萄糖(dTDP‐Glc).方法：1.体外PCR 扩增肺炎链球菌23F 型cps23FL 基因,连接至pET‐28a 载体,转化至BL21(DE3)宿主菌中表达,以Ni 亲和柱纯化并通过SDS‐PAGE 鉴定.2.建立酶促反应体系,产物以阴离子交换层析纯化,冻干后重悬鉴定.3.以偶联焦磷酸酶法研究Cps23 FL 蛋白的酶促反应动力学.结果：1.获得外源表达蛋白,根据SDS‐PAGE 鉴定,该蛋白是Cps23FL 蛋白.2.以HPLC 和MALDI‐TOF 鉴定Cps23FL 蛋白酶促反应产物是dTDP‐Glc；3.Cps23FL 蛋白酶促反应最适温度是25℃,最适pH 是7.5,最适离子种类及浓度分别是Mg2+和5mM ； Cps23FL 蛋白对dTTP 的Vmax 是0.004149±0.0001564mM/min,Km 是0.009467± 0.001578 mM,Cps23FL 蛋白对Glc‐1‐P 的Vmax 是0.008359± 0.000009331mM/min,Km 是0.01804± 0.001481mM .本研究通过体外表达肺炎链球菌23F 型Cps23FL 基因,发现其编码产物具有胸苷转移酶功能,因此我们认为Cps23FL 基因编码胸苷转移酶,这为下一步筛选肺炎链球菌抑制剂提供基础.商业化的dTDP‐Glc 成本较高,本研究通过酶法合成dTDP‐Glc,为下一步酶法合成dTDP‐鼠李糖提供基础.