【摘 要】
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氨基酸脱氢酶(EC.1.4.1.X)能催化氨基酸及其对应酮酸之间的可逆氧化脱氨和还原氨化反应,可从酮酸出发以游离氨作供体进行氨基酸的生物合成,其催化副产物为水,因此,利用该
【机 构】
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工业酶国家工程实验室,中国科学院天津工业生物技术研究所
【出 处】
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第七届中国工业生物技术发展高峰论坛
论文部分内容阅读
氨基酸脱氢酶(EC.1.4.1.X)能催化氨基酸及其对应酮酸之间的可逆氧化脱氨和还原氨化反应,可从酮酸出发以游离氨作供体进行氨基酸的生物合成,其催化副产物为水,因此,利用该酶进行氨基酸的直接手性生物合成是经济且环保的方法.氨基酸脱氢酶有严格的手性选择性,目前已有许多使用L-氨基酸脱氢酶生产L-氨基酸的报道,但D-氨基酸脱氢酶的报道很少.meso- Diaminopimelate脱氢酶(Dapdh)是一个NADP+依赖型的脱氢酶,有严格的D-选择性.本实验室从Symbiobacteriumtherophilum 中获得了一个Dapdh,该酶是其家族首个可催化丙酮酸生成D-丙氨酸的酶,其产物ee值＞99％.在蛋白质晶体结构数据库中,和该酶同源性最高的结构的蛋白质序列的一致性为33％.为进一步研究该酶的催化反应机理等特征,我们对其进行了表达纯化及晶体培养工作,获得了空晶体、浸泡辅酶NADP的晶体、同时浸泡辅酶NADP和底物DAP的晶体.空晶体及和辅酶共结晶的晶体使用Rigaku Micro Max-007HF衍射仪进行衍射,用Rigaku R-AXIS IV++CCD进行了数据收集,采用d*treak进行数据处理,这两种晶体均能衍射到1.93 ？；和辅酶及底物共结晶的晶体较小,衍射较差,使用BL13B1线站(台湾国家同步辐射研究中心,NSRRC)对其进行数据收集,数据处理软件为HKL3000,该晶体能衍射到2.12 ？.
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