【摘 要】
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目的 本研究通过TMT 标记肽组的LC-MS 技术分析辐射肺癌细胞来源的外泌体蛋白的变化，并对外泌体蛋白进行定量和差异分析。方法(1)利用梯度差速超速离心法提取辐照肺癌细胞A549 上清液中的外泌体。(2)利用纳米颗粒跟踪分析技术分析外泌体颗粒直径和浓度，利用电子透射电镜观察外泌体形态，通过蛋白免疫印迹分析对提取的外泌体marker 蛋白进行鉴定。(3)运用LC-MS技术分析辐射后肺癌细胞释放的外
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京市放射生物学重点实验室,北京,100850
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的 本研究通过TMT 标记肽组的LC-MS 技术分析辐射肺癌细胞来源的外泌体蛋白的变化，并对外泌体蛋白进行定量和差异分析。方法(1)利用梯度差速超速离心法提取辐照肺癌细胞A549 上清液中的外泌体。(2)利用纳米颗粒跟踪分析技术分析外泌体颗粒直径和浓度，利用电子透射电镜观察外泌体形态，通过蛋白免疫印迹分析对提取的外泌体marker 蛋白进行鉴定。(3)运用LC-MS技术分析辐射后肺癌细胞释放的外泌体蛋白质组分变化并进行定量和功能分析。结果：(1)通过外泌体粒径分析和浓度测量、透射电镜下形态学观察和外泌体marker蛋白的鉴定，确定了辐照A549 细胞来源的外泌体。(2)通过TMT 定量分析，结果显示鉴定到2257 条肽段和687 个蛋白，其中能够定量的蛋白为662 个。对这662 个定量蛋白进行聚类分析和Cluster 趋势分析，结果显示主要的Cluster 有6 个，其中Custer5类别趋势跟预期一致，我们以cluster5 的蛋白作为差异蛋白进行后续功能分析。(3)对鉴定到的蛋白在Human exosome database 数据库中进行比较，结果显示定量到的662 个外泌体蛋白中有604 个外泌体蛋白被以往鉴定到，此外，我们还额外鉴定到58 个新的外泌体蛋白，在Top100 的外泌体蛋白质数据库中有84 个蛋白被本次实验鉴定到。(4)对外泌体差异蛋白的聚类趋势分析显示，主要富集到细胞迁移、细胞外基质构成、细胞黏附等生物学途径；富集到Phagosome 和ECM-receptor interaction 等KEGG 通路。结论 辐照肺癌细胞A549 分泌的外泌体蛋白组分发生明显变化，其中定量到662 个差异性外泌体蛋白，聚类和功能分析发现这些差异蛋白参与多种细胞生物学过程。
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