【摘 要】
：
目的 在治疗新生儿缺血缺氧性脑病的最有前景的治疗方法中,神经干细胞移植研究取得了长足的进展.然而,目前对影响神经干细胞增殖分化特性的重要基因之间的相互作用知之甚少.Mecp2和Pten均为调控神经干细胞的重要基因.本课题以中枢神经系统MeCP2和/或PTEN条件性敲除小鼠、MeCP2过表达小鼠为研究对象,采用体内和体外实验研究Mecp2和Pten基因对神经干细胞增殖分化的影响,探讨Mecp2和Pt
【机 构】
：
复旦大学附属儿科医院新生儿科/中科院神经所,上海 200032
【出 处】
：
庆祝中国当代儿科杂志创刊15周年大会暨当代儿科论坛
论文部分内容阅读
目的 在治疗新生儿缺血缺氧性脑病的最有前景的治疗方法中,神经干细胞移植研究取得了长足的进展.然而,目前对影响神经干细胞增殖分化特性的重要基因之间的相互作用知之甚少.Mecp2和Pten均为调控神经干细胞的重要基因.本课题以中枢神经系统MeCP2和/或PTEN条件性敲除小鼠、MeCP2过表达小鼠为研究对象,采用体内和体外实验研究Mecp2和Pten基因对神经干细胞增殖分化的影响,探讨Mecp2和Pten在神经干细胞中的相互作用,以期通过对关键基因的干预,探索促进神经干细胞修复新生儿脑损伤的有效途径.方法 (1)在原代培养小鼠神经元中,慢病毒(lentivirus)敲减或增强MeCP2的表达,检测PTEN表达的改变.(2)通过慢病毒介导的方法,敲减MeCP2和PTEN的表达,观察体外培养胚胎神经干细胞的增殖分化情况.(3)分别采用中枢神经系统MeCP2基因条件性敲除小鼠和中枢神经系统PTEN基因条件性敲除小鼠,与野生型小鼠比较,观察MeCP2、PTEN对神经干细胞增殖和分化的影响.(4)采用中枢神经系统MeCP2基因条件性敲除小鼠作为模型,用腺相关病毒(AAV)载体过表达PTEN,观察在MeCP2基因敲除小鼠体内神经干细胞增殖与分化的表型的变化.结果 (1)在原代培养小鼠神经元中：1.下调MeCP2表达后,PTEN蛋白表达水平下降；2.上调MeCP2表达后,PTEN蛋白表达水平升高.(2)通过慢病毒介导的方法：敲减MeCP2后,分别进行增殖和分化培养,免疫荧光标记结果显示神经干细胞的增殖(BrdU+)和分化成神经元(TuJ1+)数目分别较对照组增加(P＜0.05)；敲除PTEN分别进行增殖和分化培养,免疫荧光标记结果显示神经干细胞的增殖(BrdU+)和分化成神经元(TuJ1+)数目在PTEN表达量下降后均增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3)用中枢神经系统MeCP2基因条件性敲除小鼠作为模型,用腺相关病毒载体过表达PTEN,发现在MeCP2基因敲除小鼠体内,神经干细胞增殖与分化数目高于对照组.结论 (1)敲除MeCP2可导致PTEN蛋白水平的降低；(2)敲除MeCP2和敲除PTEN均可促进神经干细胞增殖和促进神经干细胞向神经元的分化；(3)敲除MeCP2后通过上调PTEN能够恢复被影响的神经干细胞增殖与分化表型.
其他文献
Objective To investigate the change patterns of Histone 3 lysine 9 acetylation (H3K9ac) and the expression profile of histone deacetylase 1(HDAC1), HDAC3, HDAC4 and HDAC6 in zebrafish development.Meth
Background & Aims: The hepatitis B virus X protein (HBx) has been implicated as an oncogene in both epigenetic modifications and genetic regulation during hepatocarcinogenesis, but the underlying mech
Background & Aims: H19 is one of the earliest identified and studied long noncoding RNAs.It is presumed that H 19 is essential for regulating development and disease conditions, and is associated with
目的 Prader Willi综合征(Prader Willi syndrome,PWS)属于非孟德尔遗传性疾病,其发病机制是由于基因组印迹遗传异常.PWS发生的遗传学异常包括：①父源15q11.2-13区域缺失,约占70％；②15q11-13母源单亲二倍体,约占25％；③印迹基因功能缺陷.在父源性缺失病例中,依据缺失范围的大小,又分为Ⅰ型缺失、Ⅱ型缺失.本研究旨在分析不同基因型患儿的表型差异,建
目的 肝癌是世界第6大肿瘤,同时在肿瘤导致的死亡中排第3位.男性肝癌患病率明显高于女性,尽管已有很多相关研究,但其具体原因仍不清楚.方法和结果 我们利用第二代测序技术,对3例男性肝癌患者肿瘤组织与癌旁组织进行转录组测序.我们发现Y染色体上假基因编码的长链非编码RNA RBMY2FP (RNA binding motif protein,Y-linked,family 2,member F pseu
Background & Aims: Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) plays a pivotal role in tumor invasion and dissemination.Although it is well documented that EMT occurred predominantly at the tumor edge whe
目的 研究轮换使用抗生素对新生儿重症监护病房多重耐药菌耐药谱的影响.方法 对新生儿重症监护病房内抗生素使用实行轮换,以观察细菌耐药谱的变化.方法回顾性分析2009年1月～2012年12月武汉市儿童医院NICU收治的620例应用哌拉西林舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦或头孢吡肟的患儿,观察大肠埃希菌ESBLS阳性感染的207例在连续5个研究阶段轮换使用头孢他啶和头孢哌酮/舒巴坦时细菌耐药性的变化.第一阶段6
目的 探讨足月低血糖新生儿的临床特征及MRI表现的相关性.方法 回顾性分析2008年6月1日至2011年6月30日复旦大学附属儿科医院新生儿科收治的23例足月低血糖新生儿的病例资料,根据MRI检查结果分为低血糖MRI阴性组(n=9)和低血糖MRI阳性组(n=14),分析两组低血糖新生儿的临床特征并描述低血糖MRI阳性组的MRI表现.结果 两组低血糖新生儿在严重低血糖(血糖≤1.5 mmol/L)的
目的 新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)死亡率高,存活者预后差,目前尚无特效治疗.我们的前期研究表明,丙酮酸钠和皮下注射胰岛素样生长因子(IGF-1),二者均在一定程度改善HIE预后；而联合两种药物对HIE有协同保护作用.与丙酮酸钠相比,丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)具有物理特性更稳定,副作用少等优点,我们前期研究已证实,EP联合IGF-1对体外培养的神经元糖氧剥夺损伤(OGD)有协
目的 探讨振幅整合脑电图(aEEG)和头颅核磁共振(MRI)表现在亚低温联合红细胞生成素(EPO)治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)中的相关性.方法 对2012年1月至2013年1月于复旦大学附属儿科医院新生儿科收治的14例进行亚低温联合EPO治疗的HIE患儿进行连续的aEEG描记,aEEG的描记时间从亚低温开始前至复温结束后,对aEEG的背景活动、睡眠周期(SWC)、是否出现惊厥与亚低温结束后的