【摘 要】
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[目的]研究正常细胞受电离辐射后exosomes中miR-7-5p对细胞自吞噬的作用及机制。[材料和方法]取对数期生长的正常肺支气管上皮细胞BEP2D,分为照射组和非照射组,照射前30min更换新鲜培养基,给予2Gy的60CO-γ射线,照射后4hr和8hr超速离心法收集细胞上清分离其中的exosomes,电子显微镜下观察exosomes的形态及大小；提取exosomes中的RNA,基因芯片技术对e
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京市放射生物学重点实验室,北京100850;苏州大学放射医学与防护学院,苏州215123
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]研究正常细胞受电离辐射后exosomes中miR-7-5p对细胞自吞噬的作用及机制。[材料和方法]取对数期生长的正常肺支气管上皮细胞BEP2D,分为照射组和非照射组,照射前30min更换新鲜培养基,给予2Gy的60CO-γ射线,照射后4hr和8hr超速离心法收集细胞上清分离其中的exosomes,电子显微镜下观察exosomes的形态及大小；提取exosomes中的RNA,基因芯片技术对exosomes中的微小RNA(micro RNA,miRNA)的表达谱进行差异性分析,选择表达上调较明显的miR-7-5p进一步研究；实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR)进一步验证BEP2D细胞受照后miR-7-5p在细胞内外的表达变化；激光共聚焦荧光显微镜下观察过表达的miR-7-5p和exosomes中的miR-7-5p对细胞的自吞噬作用；给予miR-7-5p inhibitor处理后再通过激光共聚焦荧光显微镜观察exosomes中的miR-7-5p对细胞自吞噬的作用,Western blot检测自噬相关蛋白LC3和miR-7-5p靶基因ATG1B的变化,进一步探讨引起这种作用的相关机制。[结果]60CO-γ射线2Gy照射后4hr BEP2D细胞即可分泌exosomes,形态为圆形,大小不一,直径为50-100nM；辐射后的exosomes中miRNA的表达差异性较明显,并且在照射后4hr细胞内的miR-7-5p的表达降低,而exosomes中(细胞外)miR-7-5p明显升高；过表达的miR-7-5p以及exosomes中的miR-7-5p均可使细胞发生自吞噬现象,自吞噬相关蛋白表达升高,miR-7-5p inhibitor减弱辐射后的exosomes中miR-7-5p对细胞自吞噬的作用；miR-7-5p靶基因ATG1B的转录和翻译水平均有不同程度的抑制。[结论]电离辐射导致BEP2D细胞分泌exosomes,exosomes中的miR-7-5p促进未辐射细胞发生自吞噬作用,其作用机制与miR-7-5p的靶基因ATG1B表达受抑制以及电离辐射的非靶效应有关。
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