论文部分内容阅读
目的:初步探讨异体骨髓间充质干细胞对活体动物增生性瘢痕形成的影响,为进一步将异体间充质千细胞用于增生性瘢痕的防治提供基础研究资料.方法:以成年6只健康雄性新西兰白兔为实验动物,于新西兰白兔双耳腹侧分别建立大小为6mm圆形增生性瘢痕模型,每只兔耳分别建立6个增生性瘢痕模型.随机选择6只兔左耳为实验组(共36个创面),右耳为对照组(共36个创面):实验组分别于上皮化完成后第2日(模型建立20天左右)和上皮化完成后第10日(模型建立30天左右),取第5代经BrdU标记后生长良好的异体BMSCs0.2ml(5×105/ml)于增生性瘢痕软骨膜上层进行环形注射.对照组在上述相应时间点注射相同剂量的PBS缓冲液;实验组与对照组分别于模型建立37天(第2次细胞移植后6天左右)取材.记录各实验组增生性瘢痕的大体外观,HE及VG染色观察其组织学变化,实验组行免疫荧光染色对移植的干细胞进行示踪.实时荧光-聚合酶链式反应(Real Time-PCR, RT-PCR)检测两组增生性瘢痕组织中核心蛋白多糖(decorn,DCN)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达变化情况,酶联免疫吸附试验(Elisa)检测增生性瘢痕组织中DCN、TGF-β1、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的蛋白表达情况.结果:术后37天对照组瘢痕增生明显,色红质硬,突出于皮面;实验组瘢痕组织体积缩小,变平变软,色泽轻度变浅.与对照组比较,HE、VG染色显示实验组成纤维细胞及炎性细胞数量减少,胶原排列较规则,胶原之间的间隙增大.对照组胶原纤维排列紧密、紊乱或成旋涡状.免疫荧光染色观察到移植细胞在组织中能够存活.RT-PCR结果显示实验组TGF-β1mRNA表达量较对照组显著降低,DCNmRNA表达量显著升高,结果均有统计学意义(P<0.01).Elisa结果显示实验组TGF-β1,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量较对照组明显下调,DCN蛋白表达量较对照组明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:兔耳创面在上皮化形成后移植异体BMSCs移植,能够通过下调TGF-β1及上调DCN的表达,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,促进胶原排列有序等生物学效应,发挥抑制瘢痕增生提高创面愈合质量的作用.