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目的：外周血来源间充质干细胞的动员分离培养面临着收获细胞数量少和成功率低等难题.本研究旨在通过对我课题组原有兔外周血间充质干细胞分离方法进行改良优化以提高外周血间充质干细胞的分离成功率.方法：改良的分离方法主要通过采用密度梯度离心(Ficoll,1.084g/mL),高密度细胞接种(2×106),高浓度血清(30％)以及延时贴壁培养相结合的方法以分离外周血间充质干细胞：在AMD3100以及G-CSF联合动员30只新西兰大白兔外周血后,以改良法以及原有方法分别采集15只兔外周血进行间充质干细胞分离,通过对分离成功率,光学显微镜下观察间充质干细胞的形态,成纤维细胞集落形成单位形成效率,成骨、成脂肪、成软骨分化能力,干细胞表面标记物进行分析,对改良法进行评价.结果：改良外周血间充质干细胞分离培养法能明显提高分离成功率,改良法所获细胞具有更高的成纤维细胞集落形成单位形成效率(P＜0.05).两种分离培养法获得的间充质干细胞的形态均为成纤维细胞样；且三系分化能力以及干细胞表面标记物分析均无明显差异(P＞0.05).结论：改良外周血间充质干细胞分离法可提高分离成功率以及增加成纤维细胞集落形成单位形成效率,所获细胞具有间充质干细胞表型以及三系分化能力.