【摘 要】
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[目的]观察纳米二氧化钛颗粒(TiO2 nanoparticles,TNPs)对人支气管上皮细胞BEAS-2B生长、凋亡和自噬的影响,探讨miRNA34a在其中的调控作用.[方法]对纳米二氧化钛进行表征
【机 构】
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首都医科大学公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系,北京100069
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]观察纳米二氧化钛颗粒(TiO2 nanoparticles,TNPs)对人支气管上皮细胞BEAS-2B生长、凋亡和自噬的影响,探讨miRNA34a在其中的调控作用.[方法]对纳米二氧化钛进行表征,包括形貌特征及粒径分布、分散性及稳定性检测.将0、6.25、12.5、25μg/mL TNPs染毒BEAS-2B细胞24h后,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况；乳酸脱氢酶漏出实验(LDH)检测细胞膜完整性；实时荧光定量聚合酶链反应检测miRNA34a以及Bcl-2,Beclin-1 mRNA的表达情况.构建up-miRNA34a基因的重组慢病毒载体,转染BEAS-2B细胞,同时转染含GV369空载体的病毒液作为阴性对照,然后加入25μg/mL TNPs作用24 h后收集细胞,提取细胞RNA,检测miRNA34a以及Bcl-2,Beclin-1 mRNA的表达情况.[结果]应用透射电镜(TEM)对锐钛矿型纳米二氧化钛进行形貌观察,结果显示：纳米二氧化钛形态不规则,平均粒径为22.07±8.93nm；采用动态光粒度分析仪(DLS)和Zeta电位粒度分析仪检测纳米二氧化钛在不同时间点不同介质(纯水、无血清DMEM培养基)中的水合粒度及Zeta电位,发现纳米二氧化钛在不同介质中的均会发生一定程度的团聚.不同浓度的纳米二氧化钛作用于BEAS-2B细胞后,其细胞存活率下降且呈剂量依赖性.细胞乳酸脱氢酶LDH活性随浓度增高而上升,呈剂量依赖性(P＜ 0.05.PCR检测结果表明,TNPs呈剂量依赖性使miRNA34a表达下降,而Bcl-2与Beclin-1mRNA的表达均升高(P＜0.05).慢病毒LV-hsa-mir-34a-up感染BEAS-2B细胞后,与对照及空病毒组比较,过表达目的基因mir-34a组的miR34a上调,表明转染成功；miR34a上调逆转了TNPs诱导的Bcl-2和Beclin1基因的表达(P＜0.05).[结论]miRNA34a通过靶向Bcl-2和Beclin-1调控TNPs引起的BEAS-2B细胞毒性.
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