【摘 要】
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细菌漆酶因其具有碱性催化和卤素离子耐受等特性可作为真菌漆酶的理想替代物用于某些特定工业领域.然而,一些细菌漆酶在大肠杆菌中异源表达时多以包涵体形式出现,或者在制备
【机 构】
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安徽大学生命科学学院,安徽省合肥市经开区九龙路111号,230601安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心,安徽省合肥市经开区九龙路111号,230601
【出 处】
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2014年第六届全国微生物遗传学学术研讨会
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细菌漆酶因其具有碱性催化和卤素离子耐受等特性可作为真菌漆酶的理想替代物用于某些特定工业领域.然而,一些细菌漆酶在大肠杆菌中异源表达时多以包涵体形式出现,或者在制备和保藏中表现出热不稳定性,限制了其实际应用.在本研究中,根据前期获得的晶体结构,我们尝试用理性设计的方法提升细菌漆酶Lac15在大肠杆菌异源表达的产率和热稳定性.研究表明,去除表达载体中的His6标签和蛋白氨基酸序列中的323-332片段,获得的突变体蛋白可在常温下可溶性表达,并表现出了更好的热稳定性:对比携带His6标签的重组Lac15蛋白在16℃下只有50％左右可溶性表达,突变体蛋白在28℃下完全以可溶形式表达,且其在低于35℃下表现出了比重组Lac15蛋白高两倍的活性,在45℃下的半衰期也增加了一倍.
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