【摘 要】
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胚胎期肌肉生长发育是成肌细胞衍生、增殖、融合、分化形成肌纤维的过程.在胚胎期,成肌细胞起源于中胚层的间充质干细胞,由生皮肌节分化形成的部分祖代细胞衍生而来,经融合形成多核初代肌管,进一步分化为成肌纤维；另一部分祖代细胞形成骨骼肌卫星细胞,存在于成熟的肌纤维膜和肌纤维基片之间,形成静息卫星细胞.胚胎期是骨骼肌细胞增殖分化的关键阶段,胚胎期肌纤维的生长发育决定了出雏后肌肉的发育潜能及肉品质的形成.在此
【机 构】
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南京农业大学动物科技学院 江苏南京210095
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十七次全国家禽学术研讨会
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胚胎期肌肉生长发育是成肌细胞衍生、增殖、融合、分化形成肌纤维的过程.在胚胎期,成肌细胞起源于中胚层的间充质干细胞,由生皮肌节分化形成的部分祖代细胞衍生而来,经融合形成多核初代肌管,进一步分化为成肌纤维；另一部分祖代细胞形成骨骼肌卫星细胞,存在于成熟的肌纤维膜和肌纤维基片之间,形成静息卫星细胞.胚胎期是骨骼肌细胞增殖分化的关键阶段,胚胎期肌纤维的生长发育决定了出雏后肌肉的发育潜能及肉品质的形成.在此过程中,Ebp1 对肌细胞的增殖、分化有重要的作用,但其作用机制.本文通过对鸡胚胎期9 天的骨骼肌成肌细胞进行原代培养.通过免疫荧光染色检测EBP1 蛋白在鸡胚骨骼肌及成肌细胞中的表达情况；荧光定量PCR 检测Ebp1 基因内源性表达和成肌细胞分化相关基因的表达规律；利用慢病毒干扰技术建立Ebp1 基因敲减模型,进而研究Ebp1 对生肌因子的表达及成肌细胞分化的影响.主要的研究结果如下：1.Ebp1 在鸡胚成肌细胞中内源性表达情况.结果表明：Ebp1 在鸡胚骨骼肌及体外培养的成肌细胞中都有表达；并且在成肌细胞的分化过程中,表达量显著升高.2.慢病毒干扰敲减Ebp1 基因及最佳位点筛选.结果表明：构建四个干扰位点敲减Ebp1 基因,同时进行药物筛选,进行干扰优化；通过荧光定量PCR 检测,最终筛选出两个位点,Ebp1 表达量极显著下降(P＜0.01),敲减效果达到70％以上,干扰效果明显.3.Ebp1 敲减后对成肌细胞分化相关基因表达的影响.结果表明：敲减Ebp1 后,用分化培养基培养成肌细胞0h、24h、48h,分化相关基因MyoD、MyoG 及MyhC 的表达与对照组相比均显著下降(P＜0.01)；Mrf4 在24h 与对照组相比降低但变化不显著,48h 与对照组相比显著下降(P＜0.01)；Mef2A 与对照组相比变化不显著,几乎没影响.通过成肌细胞体外诱导分化和慢病毒干扰技术敲减Ebp1,结果发现Ebp1 敲减后显著抑制分化相关基因MyoD、MyoG、MyhC 和Mrf4 的表达,肌纤维融合程度下降,从而抑制了成肌细胞的分化.本实验为进一步研究Ebp1 调控成肌细胞发育的分子机制提供技术平台和理论基础.
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