【摘 要】
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为检测抗粘病毒基因(Myxovirus-resistant,Mx)的抗口蹄疫病毒功能,本研究构建了pEGFP-N1-Mx1真核表达载体,与对照质粒pEGFP-N1转染BHK21细胞,经G418筛选和Western Blot检测,获得BHK21-Mx1细胞系和BHK21-N1对照细胞系,利用免疫荧光技术进行Mx1细胞定位和BHK21-Mx1、BHK21-N1的FMDV感染实验。结果表明,成功克隆了牛
【机 构】
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山东省农业科学院奶牛研究中心,济南,250131 中国农业科学院兰州兽医研究所,兰州,730046
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会
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为检测抗粘病毒基因(Myxovirus-resistant,Mx)的抗口蹄疫病毒功能,本研究构建了pEGFP-N1-Mx1真核表达载体,与对照质粒pEGFP-N1转染BHK21细胞,经G418筛选和Western Blot检测,获得BHK21-Mx1细胞系和BHK21-N1对照细胞系,利用免疫荧光技术进行Mx1细胞定位和BHK21-Mx1、BHK21-N1的FMDV感染实验。结果表明,成功克隆了牛Mx1基因,构建了pEGFP-Mx1真核表达载体,获得了BHK21-Mx1和BHK21-N1细胞系,Mx1定位于细胞质中,BHK21-Mx1可抵御100TCID50病毒的攻击,BHK21-Mx1不同时间段的细胞毒液的TCID50比对照组降低至少80倍,表明牛Mx1具有抗FMDV作用。
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本实验从华东地区某羊场采集定点监测的绵羊血液样品,通过RT-PCR方法检测瘟病毒5-UTR基因,证实一只绵羊感染BDV.阳性血清样品接种MDBK细胞,盲传8代后观察,该毒株不致细胞病变。用BDV特异性Npro基因引物检测细胞培养物RNA,在第6-8代细胞培养物中获得预期大小片段,测序分析表明成功分离出一株BDV,将其命名为JSLS12-01.5-UTR和Npro基因系统进化分析显示,该分离株与BD
本研究应用MDBK细胞从长春某牛场发生疑似为牛病毒性腹泻-粘膜病的病牛粪样中分离到一株病毒,经过电镜观察和序列测定证实为牛病毒性腹泻病毒,并将其命名为牛病毒性腹泻病毒CC13B株(BVDV-CC13B).对BVDVCC13B株完整基因组序列进行了测定,结果显示CC13B毒株的全基因组为12281 bp.将BVDV-CC13B毒株的全长基因组序列与发表的BVDV病毒序列进行同源性比对,结果其核苷酸序
根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入酵母(P.Pastoris)分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2.用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化P.Pastoris GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用
为了解宁夏牛传染性支原体肺炎的感染情况,采用牛支原体间接ELISA试剂盒对发生4起牛支原体肺炎的疫区及其周边地区的牛进行了支原体肺炎抗体血清学调查。结果显示3月龄-1岁之间的牛发病明显,主要表现为肺炎和关节炎;调入牛经过长途运输后进入本地1周内发病,且发病数量急剧上升;调入隐性带菌牛与本地牛同群混合饲养后,3月龄-1岁之间的本地牛发病明显,有接触史的绵羊呈隐性感染。调查结果表明,在引进牛群时应该对
利用高通量测序技术构建牛病毒性腹泻病毒BVDV感染和未感染的MDBK细胞microRNAs的表达谱。利用生物信息学软件分析差异表达的microRNAs.Hoechst染色、流式细胞仪检测和caspase酶活性检测分析miR-1249的靶蛋白。WB、荧光素酶报告基因检测系统验证miR-1249的靶蛋白。结果显示,BVDV感染的细胞与正常细胞相比,差异表达的microRNA共28个,其中26个micr
为表达牛乳头瘤病毒2型(BPV2)衣壳蛋白L1基因。本研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料中扩增BPV2沙湾分离株L1基因,克隆入pMD18-T载体中,测序后进行序列分析。将BPV2沙湾株L1基因亚克隆入原核表达质粒pGEX4T-1中,用IPTG诱导L1蛋白表达,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。SDS-PAGE分析显示,诱导后能够表达分子量80ku的重组蛋白;Wes
2012年初,从安徽某羊场发生腹泻的山羊病料中检测分离到边界病病毒(Border disease virus,BDV),证明BDV在我国羊群中存在。为了进一步了解BDV在江苏羊群的流行情况,本研究收集江苏部分地区发生腹泻或健康羊群的血清和组织样品,采用RT-PCR方法进行检测,并对阳性样品进行病毒的分离鉴定,测定分离毒株5-UTR基因片段,与其他已报道的毒株进行同源性比较并绘制进化树。结果表明有2
为了建立特异性牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。本研究用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9).选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA板,用HRP标记的单克隆抗体2F4作为夹心抗体,建立了检测BV
目的：通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性。方法：将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1gG–/TK–/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒B
牛轮状病毒(BRV)引起的腹泻在新生犊牛最为常见。在病原流行病学调查的基础上进行多价疫苗的研制，是预防和控制犊牛RV腹泻的关键。本文对国内外BRV病原学以及防控措施的研究进行总结，旨在为我国犊牛RV腹泻综合防控措施的建立提供理论和实验依据。指出，怀孕牛产前1～2个月一次接种BRV基因重配二价减毒疫苗，犊牛出生后及时足量地饲喂初乳，可有效预防犊牛的BRV腹泻。