【摘 要】
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目的：通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性。方法：将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1gG–/TK–/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒B
【机 构】
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农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学;华中农业大学动物科技学院 农业微生物学国家重点实验室,华
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会
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目的：通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性。方法：将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1gG–/TK–/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒BHV-1 gG–/TK–/GM-CSF+.并对重组病毒的生物学特性和对日本大耳白兔的免疫原性进行了评价。结果：利用PCR和RT-PCR证实GM-CSF基因表达盒已正确插入重组病毒的tk基因位置,并具有转录活性。亲本株和重组株的空斑形态、空斑直径大小无明显差异;两者病毒滴度无明显变化,生长曲线相似;体外遗传稳定性良好。兔体实验表明在免疫早期重组毒株能产生较亲本株更高水平的IFN-β(P＜0.05).但中和抗体水平、攻毒后的临床症状及病毒排毒时间等各项指标检测表明,亲本株和重组毒株之间无明显差异。结论：在免疫早期重组株刺激机体产生的IFN-β高于亲本株,具有一定的应用前景。
其他文献
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随着干扰素(Interferon)在养殖业尤其是家禽养殖业上的应用越来越广泛,干扰素在提高机体免疫力和增强免疫应答的作用受到人们的广泛关注。本实验选用在一个生产周期(约45天)的白羽肉鸡,通过对使用和未使用干扰素的两组商品肉鸡在鸡新城疫、禽流感H9抗体影响效果的比较,并进行抗体检测数据统计和方差分析,研究干扰素对商品肉鸡免疫效果的影响,以便更好为今后的养殖生产提供借鉴。
本实验从华东地区某羊场采集定点监测的绵羊血液样品,通过RT-PCR方法检测瘟病毒5-UTR基因,证实一只绵羊感染BDV.阳性血清样品接种MDBK细胞,盲传8代后观察,该毒株不致细胞病变。用BDV特异性Npro基因引物检测细胞培养物RNA,在第6-8代细胞培养物中获得预期大小片段,测序分析表明成功分离出一株BDV,将其命名为JSLS12-01.5-UTR和Npro基因系统进化分析显示,该分离株与BD
本研究应用MDBK细胞从长春某牛场发生疑似为牛病毒性腹泻-粘膜病的病牛粪样中分离到一株病毒,经过电镜观察和序列测定证实为牛病毒性腹泻病毒,并将其命名为牛病毒性腹泻病毒CC13B株(BVDV-CC13B).对BVDVCC13B株完整基因组序列进行了测定,结果显示CC13B毒株的全基因组为12281 bp.将BVDV-CC13B毒株的全长基因组序列与发表的BVDV病毒序列进行同源性比对,结果其核苷酸序
根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入酵母(P.Pastoris)分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2.用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化P.Pastoris GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用
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利用高通量测序技术构建牛病毒性腹泻病毒BVDV感染和未感染的MDBK细胞microRNAs的表达谱。利用生物信息学软件分析差异表达的microRNAs.Hoechst染色、流式细胞仪检测和caspase酶活性检测分析miR-1249的靶蛋白。WB、荧光素酶报告基因检测系统验证miR-1249的靶蛋白。结果显示,BVDV感染的细胞与正常细胞相比,差异表达的microRNA共28个,其中26个micr
为表达牛乳头瘤病毒2型(BPV2)衣壳蛋白L1基因。本研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料中扩增BPV2沙湾分离株L1基因,克隆入pMD18-T载体中,测序后进行序列分析。将BPV2沙湾株L1基因亚克隆入原核表达质粒pGEX4T-1中,用IPTG诱导L1蛋白表达,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。SDS-PAGE分析显示,诱导后能够表达分子量80ku的重组蛋白;Wes
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