人乳铁蛋白cDNA的克隆及在家蚕细胞中的表达

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从人的乳腺组织中克隆了人乳铁蛋白(hLF)cDNA,其DNA序列与GenBank中另外4个hLF cDNA序列具有高度的同源性(同源性达到99%)。将人乳铁蛋白cDNA克隆在质粒pBacPAK8的Barn HⅠ位点和Xhol Ⅰ位点,构建成重组转移质粒pBacPAK-hLF。该质粒DNA与已线性化BacPAK6病毒株基因组DNA经脂质体介导共转染家蚕培养细胞BmN,在培养的贴壁细胞中挑出空斑,经过3轮纯化,获得重组病毒BacPAK-hLF。蛋白质免疫印迹法检测到在重组病毒感染的家蚕细胞中存在人乳铁蛋白基因的表达产物,分子量约为78kD,ELISA法测定结果表明重组病毒感染的家蚕细胞中rhLF相对表达量在表达144小时达到最高值,约为13.5mg/L。重组hLF的体外生物活性试验表明其对大肠杆菌具有抑菌活性。
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