【摘 要】
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目的：构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统，鉴定表达产物的免疫原性，了解钩体野生株lipL32和lipL41基因携带和表达情况及钩体病人血清抗体水平。方法：采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/1融合基因，常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达情况。采用Weste
【机 构】
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杭州师范学院医学院,浙江 杭州 310012;浙江大学医学院病原生物学教研室,浙江 杭州 310031
【出 处】
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首届长三角科技论坛：长三角生物医药发展论坛
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目的：构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统，鉴定表达产物的免疫原性，了解钩体野生株lipL32和lipL41基因携带和表达情况及钩体病人血清抗体水平。
方法：采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/1融合基因，常规方法构建其原核表达系统。
采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达情况。采用Western blot鉴定rLipL32/1-rLipL41/1的免疫原性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株lipL32和lipL41基因及其表达情况。采用ELISA检测228例钩体病人血清lipL32和lipL41基因产物的抗体。
结果：与报道的相关序列比较，lipL32/1-lipL41/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9％和99.8％。目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达产量约为细菌总蛋白的10％，主要以包涵体形式存在。
rLipL32/1和rLipL41/1兔抗血清均能与rLipL32/1-rLipL41/1结合。97.9％(95/97)和87.6％(85/97)问号钩体野生株分别有lipL32和lipL41基因。95.9％(93/97)和84.5％(82/97)问号钩体野生株分别与rLipL32s和rLipL41s兔抗血清出现效价范围为1:4～1:128的MAT阳性结果。分别有94.7％～97.4％和78.5％～84.6％病人血清rLipL32s和rLipL41s抗体阳性。
结论：本研究成功地构建了lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统，所表达的产物具有良好的免疫原性。lipL32和lipL41是广泛存在于不同血清群问号钩体并有较高表达率的基因，且其不同基因型的表达产物有广泛的抗原和抗体交叉。rLipL32/1-rLipL41/1具有成为钩体属特异性基因工程疫苗抗原的良好前景。
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