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利用Bacillus subtilis Natto进行深层发酵可制备纳豆激酶。采用发酵液离心除菌、20%~60%饱和度的硫酸铵沉淀、Superdex 75凝胶过滤层析和SP Sepharose Fast Flow离子交换层析对活性组分进行了分离提纯。结果表明经过分离纯化后,蛋白质纯度在SDS-PAGE中可得到单一条带、纯化倍数和酶活回收率分别为8.4和49%。纯化纳豆激酶的最适反应温度为55℃,在pH6-12的范围内均有较好的稳定性,纳豆激酶能够直接降解纤维蛋白。