【摘 要】
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原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是甲壳类水产动物主要过敏原之一,其抗原表位与致敏作用密切相关,根据本课题组已淘选得到TM 101-111抗原表位中的关键氨基酸,采用基因定点突
【机 构】
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集美大学食品与生物工程学院 福建厦门361021
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛
论文部分内容阅读
原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是甲壳类水产动物主要过敏原之一,其抗原表位与致敏作用密切相关,根据本课题组已淘选得到TM 101-111抗原表位中的关键氨基酸,采用基因定点突变技术,用丙氨酸(Ala)替代107位关键氨基酸苏氨酸(Thr),并表达该突变体蛋白,为后续研究单个关键氨基酸的改变对其致敏性的影响奠定基础。本试验首先采用点突变技术扩增拟穴青蟹TM突变基因,构建突变体pET28a-TMT107A,将突变体转入大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)中,获得突变体重组表达菌株,利用IPTG对其进行诱导表达,采用SDS-PACE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。结果成功得到基因全长为855 bp的rTM-T107A突变体,分子量大小约为38 ku的重组蛋白,经鉴定该重组蛋白确实是TM突变体蛋白。本试验构建了rTMT107A突变体,利用大肠杆菌表达系统成功的表达了该突变体蛋白,后续试验可以通过抑制性Elisa等方法检测其IgE结合活性,探究其致敏性的变化。
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