【摘 要】
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[目的]研究C4orf21在DNA损伤修复中的功能及其作用机理. [方法]免疫荧光共定位检测其是否在辐射及DNA损伤药物处理后在DNA损伤位点形成定位,参与DNA损伤修复.IR处理ATM-/-、RNF8-/-、53BP1-/-、MDC1-/-特异性敲除的MEF细胞,免疫荧光实验研究其参与DNA损伤修复的可能途径.运用crispr技术构建C4orf21敲除细胞株,IR照射后,进行克隆形成实验及HR(
【机 构】
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中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850 北京蛋白质组研究中心,北京
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]研究C4orf21在DNA损伤修复中的功能及其作用机理. [方法]免疫荧光共定位检测其是否在辐射及DNA损伤药物处理后在DNA损伤位点形成定位,参与DNA损伤修复.IR处理ATM-/-、RNF8-/-、53BP1-/-、MDC1-/-特异性敲除的MEF细胞,免疫荧光实验研究其参与DNA损伤修复的可能途径.运用crispr技术构建C4orf21敲除细胞株,IR照射后,进行克隆形成实验及HR()-assay、NHEJ()-assay,研究其在DNA损伤修复中的功能与作用途径.通过免疫共沉淀,检测其与DNA损伤修复相关蛋白的相互作用. [结果]通过5Gy剂量IR照射293T以及MEF细胞,免疫荧光共定位检测,发现C4orf21可与γH2AX形成共定位.293T细胞内表达外源Flag-Ctip,免疫共沉淀发现C4orf21与Cyip存在相互作用.[结论]C4orf21在IR照射及Etoposide、Hu药物处理后可DNA损伤位点与γH2AX形成共定位.并且可与重要的DNA损伤修复蛋白Ctip存在相互作用,由此推测其极有可能参与DNA损伤修复过程.但是其具体功能与作用机制还有待进一步研究.
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