【摘 要】
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目的：研究细胞模型中DNA甲基化对SCA3/MJD的致病基因ATXN3的调控作用；研究DNA甲基化水平与SCA3/MJD患者的CAG重复序列拷贝数、发病年龄之间的相关性.方法：构建野生型pcDNA3.
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目的：研究细胞模型中DNA甲基化对SCA3/MJD的致病基因ATXN3的调控作用；研究DNA甲基化水平与SCA3/MJD患者的CAG重复序列拷贝数、发病年龄之间的相关性.方法：构建野生型pcDNA3.1(-)/myc-ATXN20Q质粒及突变pcDNA3.1(-)/mycATXN67Q质粒,建立SCA3转基因细胞模型；qRT-PCR和western blot分别检测ATXN3基因mRNA和ataxin-3蛋白表达水平；构建peGFP-C1-Dnmt1表达载体及Dnmt1的干扰siRNA(si-Dnmt1),qRT-PCR和western blot分别检ATXN3基因mRNA和ataxin-3蛋白表达水平的影响.收集141例SCA3/MJD和112例健康志愿者为研究对象,采用BSP法检测ATXN3基因启动子区的DNA甲基化水平；采用T载体克隆测序检测患者ATXN3基因的CAG重复序列拷贝数.结果：1.转染DNMT1至HEK293细胞48小时后,内源性野生型及扩展突变型ATXN3基因的mRNA表达水平以及内源性野生型及扩展突变型ataxin-3蛋白表达水平均低于相应对照组；沉默DNMT1的表达水平后,内源性野生型及扩展突变型ATXN3基因mRNA表达水平以及内源性野生型及扩展突变型ataxin-3蛋白表达水平均高于相应对照组.2.SCA3/MJD病例组ATXN3基因启动子区甲基化水平较对照组偏高；相同家系CAG相同的患者,发病年龄早的患者的甲基化水平偏高.有CAG重复序列动态突变家系中ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平偏高.结论：1.DNA甲基化对ATXN3基因表达有调控作用. 2.ATXN3基因启动子区DNA甲基化水平与SCA3/MJD患者的遗传早现、CAG重复序列动态突变有关.
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