【摘 要】
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目的 肺纤维化对肺组织结构和功能造成严重损伤,且临床预后很差.肺纤维化发病机制复杂,肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老在发病过程中可能起重要作用.经小鼠放射性肺纤维化衰老模型基因共表达网络分析发现AFAP1(actin filament associated protein 1)可能具有重要的调节作用.A549细胞是肺腺癌上皮细胞系,具有类肺泡Ⅱ型上皮细胞表型.本项研究通过建立博来霉素(bleomycin)诱导
【机 构】
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中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,卫计委人类疾病比较医学重点实验室,北京 100021
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目的 肺纤维化对肺组织结构和功能造成严重损伤,且临床预后很差.肺纤维化发病机制复杂,肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老在发病过程中可能起重要作用.经小鼠放射性肺纤维化衰老模型基因共表达网络分析发现AFAP1(actin filament associated protein 1)可能具有重要的调节作用.A549细胞是肺腺癌上皮细胞系,具有类肺泡Ⅱ型上皮细胞表型.本项研究通过建立博来霉素(bleomycin)诱导的A549 细胞衰老模型,分析AFAP1 在肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老过程中的作用及其机制.方法 细胞分为两组：衰老模型组用50 μg/ml的博来霉素处理A549细胞120小时,对照组用相应博来霉素溶剂处理120小时.之后用β-半乳糖苷酶染色观察SA-β-gal染色阳性细胞数以确定衰老模型构建是否成功,提取蛋白进行Western-blot 检测观察相关蛋白表达改变的情况.结果 与对照组相比,衰老组中SA-β-gal 染色阳性细胞数显著升高,p21蛋白表达水平显著升高,提示细胞衰老模型诱导成功.Western blot结果显示：与对照组相比,AFAP1 在衰老组中表达下调,Src和Src pY527表达水平没有发生变化,Src pY416表达水平下降,衰老组中Src 磷酸激酶活性降低.结论 使用博来霉素可以诱导A549 细胞衰老,衰老的细胞内AFAP1减少,可能通过降低Src激活水平抑制细胞周期,促进A549细胞衰老.
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