【摘 要】
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目的 以BCRP/ABCG2的ATP结合盒式区域为靶,开展逆转BCRP/ABCG2表达与功能的RNA干扰研究,为提高乳腺癌等恶性肿瘤化疗敏感性创立新方法.方法 利用表达小分子发夹结构RNA的逆病毒重组系统,针对BCRP/ABCG2基因ATP结合盒式区域,构建逆转录病毒重组子；经荧光定量RT-PCR、Western blot法及免疫荧光法检测筛选出含干扰效果较好的重组逆病毒(V-BCRPi)；采用药
【机 构】
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深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室,广东 深圳 518020
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目的 以BCRP/ABCG2的ATP结合盒式区域为靶,开展逆转BCRP/ABCG2表达与功能的RNA干扰研究,为提高乳腺癌等恶性肿瘤化疗敏感性创立新方法.方法 利用表达小分子发夹结构RNA的逆病毒重组系统,针对BCRP/ABCG2基因ATP结合盒式区域,构建逆转录病毒重组子；经荧光定量RT-PCR、Western blot法及免疫荧光法检测筛选出含干扰效果较好的重组逆病毒(V-BCRPi)；采用药物敏感性实验和流式细胞术评价V-BCRPi逆转药物耐受的效果；建立荷瘤的裸鼠,并经V-BCRPi行瘤体注射和腹腔注射耐受药物5-Fu,免疫组织化学法、荧光定量RT-PCR和Western blot检测肿瘤组织BCRP/ABCG2的表达,且测量瘤体体积和重量变化及原位杂交技术检测瘤组织细胞凋亡状况.结果 构建了针对ATP结合区(第六外显子的207位、745位、939位等起始点20个bp)的3个逆病毒重组子；第三号重组逆病毒(V-BCRPi)抑制BCRP/ABCG2的表达效果较好,且不仅能显著提高MIT在细胞内的存留量,而且能显著提高细胞对耐受药物的敏感性(P＜0.01)；荷瘤裸鼠瘤组织中BCRP/ABCG2的表达能被V-BCRPi有效抑制并且能增强瘤细胞对耐受药物5-Fu的敏感性,提高药物诱导瘤细胞促凋亡的效果(P＜0.01).结论 经体内外研究,获得了介导siRNA高效靶向BCRP/ABCG2基因ATP结合区的重组逆病毒逆转子(V-BCRPi),创立了一种提高乳腺癌等恶性肿瘤化疗敏感性的新方法,为恶性肿瘤的基因治疗和基因功能研究拓展了新思路.
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