【摘 要】
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随着对诱导多能干细胞(iPS细胞)的深入研究,如何优化诱导条件、诱导效率以及避免其癌变成为了关键.已有研究表明,在培育iPS细胞的时候,使用基因“L—Myc”代替基因“c—Myc”
【机 构】
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东北林业大学生命科学学院,哈尔滨150040
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会
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随着对诱导多能干细胞(iPS细胞)的深入研究,如何优化诱导条件、诱导效率以及避免其癌变成为了关键.已有研究表明,在培育iPS细胞的时候,使用基因“L—Myc”代替基因“c—Myc”,可大幅降低iPS细胞癌变的风险,从而有效生成安全的iPS细胞.为了探讨L-Myc基因逆转录病毒载体侵染小鼠成纤维细胞(MEF)的侵染效率,本研究提取12.5天胎鼠头部总RNA,反转录成cDNA,根据其序列设计cDNA引物进行PCR克隆得到包含目的基因的PCR产物,将包含目的基因的PCR产物与载体连接构建L-myc-PMD18-simple重组质粒,本研究通过参考GenBank上小鼠L-myc基因编码区序列,设计并人工合成了L-myc-1,L-myc-2引物,上游引入EcoRI,下游引入XhoI位点,以L-myc-pMD18-simple重组质粒为模板,通过PCR扩增出L-myc基因编码区序列,酶切后将其与经过相同酶切的pMX连接,最终构建pMX-L-myc重组质粒,将L-Myc-PMX与VSVG共转染293GP细胞,分别在48h与72h吸取病毒上清侵染MEF,侵染2天后提取MEF总RNA,设计特异性qPCR引物检测其侵染效率.
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