【摘 要】
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为进一步研究microRNA在细胞重编程机制中的作用,构建小鼠microRNA367逆转录病毒载体.根据NCBI上小鼠microRNA367的相关序列设计引物,在上游引入BamHI,下游引入XhoI,然后以成
【机 构】
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东北林业大学生命科学学院,哈尔滨150040
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会
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为进一步研究microRNA在细胞重编程机制中的作用,构建小鼠microRNA367逆转录病毒载体.根据NCBI上小鼠microRNA367的相关序列设计引物,在上游引入BamHI,下游引入XhoI,然后以成年ICR小鼠基因组为模板,克隆小鼠miR367基因,片段长度为350bp.将目的基因片段克隆到pMx逆转录病毒载体上并进行酶切鉴定和PCR鉴定,鉴定正确的阳性克隆送测序.用测序正确的miR367-pMx载体转染plat-E细胞用来包装逆转录病毒颗粒,分别在转染后24h和48h收集病毒悬液侵染小鼠胚胎成纤维细胞.侵染后第五天提取MEF细胞的总RNA,逆转录成cDNA,以此为模板进行Q-PCR检测.其结果,侵染后的MEF细胞中miR367的相对表达量提高了170多倍.上述结果表明,成功构建小鼠microRNA367逆转录病毒载体.
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