【摘 要】
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近年来,由于抗菌肽具有抗细菌、真菌、病原虫和病毒及其抗肿瘤细胞特性,而且不易诱发哺乳动物的红细胞发生溶血而备受关注.以往主要利用植物、昆虫和两栖类动物组织提取抗菌
【机 构】
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东北林业大学生命科学学院,哈尔滨150040
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会
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近年来,由于抗菌肽具有抗细菌、真菌、病原虫和病毒及其抗肿瘤细胞特性,而且不易诱发哺乳动物的红细胞发生溶血而备受关注.以往主要利用植物、昆虫和两栖类动物组织提取抗菌肽,但所采用的方法具有操作复杂、产量低、成本高等缺陷.为了建立大量获取中国林蛙抗菌肽的方法,本研究根据GenBank中的中国林蛙皮肤抗菌肽Temporin-1CEa基因的mRNA序列(EU624139)设计一对特异性的引物,以提取的中国林蛙皮肤总RNA反转录出的cDNA为模板,将扩增的编码序列与pEASY-T3克隆载体连接获得Tem-T3;利用酶切、连接等分子生物学手段,将GFP基因连入Tem-T3克隆载体,再经酶切获得Tem-GFP片段,并插入真核表达载体pcDNA3.1,最终得到Tem-GFP-pcDNA3.1重组质粒；利用脂质体转染法将该质粒转入绵羊成纤维细胞,48h后可在荧光倒置显微镜下观察到GFP的绿色荧光表达； Real-Time PCP显示与对照(相对表达量为1)相比,转染后绵羊成纤维细胞的融合蛋白相对表达量增高322倍.
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