【摘 要】
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[目的]提供一种简单、经济、高效的香蕉小分子RNA提取方法,以满足RT-PCR、Northern杂交等后续分子生物学研究的需要.[方法]以巴西蕉(Musa acuminataL.AAA group,Brazilian)的叶片,雄花,果实和根系为材料,利用改良的CTAB法,结合PEG8000通过分级沉淀DNA和大分子RNA,从而获得小分子RNA.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示小RNA带型区域清晰,无DN
【机 构】
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中国热带农业科学院热带作物生物技术研究所,农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室 海口571101;中国热带农业科学院航天育种研究中心,海南海口571101
【出 处】
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2014年度中国热带作物学会遗传育种专业委员会/热带香料饮料作物专业委员会年会暨学术研讨会
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[目的]提供一种简单、经济、高效的香蕉小分子RNA提取方法,以满足RT-PCR、Northern杂交等后续分子生物学研究的需要.[方法]以巴西蕉(Musa acuminataL.AAA group,Brazilian)的叶片,雄花,果实和根系为材料,利用改良的CTAB法,结合PEG8000通过分级沉淀DNA和大分子RNA,从而获得小分子RNA.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示小RNA带型区域清晰,无DNA和大分子RNA干扰,小RNA质量较好.获得的小RNA经紫外光谱分析其A260/A280的比值在1.872～2.020范围内,产量可达35 μg.g-1以上.以提取的各组织小分子RNA为模板,利用茎环RT-PCR方法,在香蕉不同组织小RNA中均检测到miRNA 156a,其扩增片断大小约为70bp,且测序结果与预测的香蕉miR156a序列一致.[结论]本实验提供了一种简便高效的香蕉小分子RNA提取方法,可满足RT-PCR、Northern blotting及小RNA文库构建等后续分子生物学研究的需要,为研究人员在实际工作中提供了更多的选择.
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