【摘 要】
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新家坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是一种严重的能引起全身性疾病的病原体,对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有SGIV感染细胞多肽ICP 46 (infected cell polypeptides 46)基因的真核表达载体pEGFP-ICP46转染到胖头鲤细胞(Fathead minnow cells,FHM)中进行融合表达,用荧光显微镜
【机 构】
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广东海洋大学水产学院,广东湛江524025;中山大学生命科学学院,有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广州510275
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新家坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是一种严重的能引起全身性疾病的病原体,对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有SGIV感染细胞多肽ICP 46 (infected cell polypeptides 46)基因的真核表达载体pEGFP-ICP46转染到胖头鲤细胞(Fathead minnow cells,FHM)中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP46-GFP融合蛋白主要分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIV ICP46的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIV ICP46的si RNA (siRNA-ICP46),与pEGFP-ICP46共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点荧光强度的变化。转染后24-48 h,实验细胞(共转染siRNA-ICP46和pEGFP-ICP46)和阳性对照细胞(共转染siRNA-GFP和pEGFP-ICP46)中的荧光微弱,发荧光的细胞数量较阴性对照(共转染siRNA-Negative和pEGFP-ICP46)少70％左右,但其后实验细胞和阳性对照细胞的荧光强度开始增强,在转染后72 h其与阴性对照组已差别不大。说明体外化学合成的siRNA-ICP46转染后24-48 h可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV ICP46基因的表达。
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