【摘 要】
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[目的]探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对肝细胞内DNA聚合酶Polη泛素化状况的影响,明确Polη在HQ诱导肝细胞DNA损伤过程中是否受到包含泛素化过程的翻译后修饰的调控作用.[材
【机 构】
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赣南医学院预防医学系,江西赣州341000
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
论文部分内容阅读
[目的]探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对肝细胞内DNA聚合酶Polη泛素化状况的影响,明确Polη在HQ诱导肝细胞DNA损伤过程中是否受到包含泛素化过程的翻译后修饰的调控作用.[材料和方法]将L-02细胞用0、10、20和40 μM的HQ分别处理24 h后,采用交互免疫共沉淀和免疫印迹技术检测Polη泛素化的状况,并采用激光扫描共聚焦荧光显微镜观察L-02细胞内Polη与泛素(Ubiquitin,Ub)之间的共定位特征.[结果]免疫共沉淀实验结果显示,Polη与Ub可在L-02细胞内发生相互作用,二者可在L-02细胞内形成复合物,并且HQ染毒组Polη蛋白的表达量均高于未染毒组.Western blot检测结果显示,在0～40μM浓度范围内,HQ可诱导L-02细胞内Polη泛素化水平升高,其中20和40 μM剂量组的Polη泛素化水平明显地高于0 μM剂量组,差别具有统计学意义(p＜0.05).细胞免疫荧光双标记及激光共聚焦扫描显微术的观察结果显示,Polη(绿色荧光标记)和Ub蛋白(红色荧光标记)均在L-02细胞的细胞核和细胞质均有分布,并且均是主要分布于细胞核内；除此之外,Ub在细胞质内核膜周围形成众多点状聚集灶.Polη与Ub在L-02细胞内的大部分位置上定位重合.随着HQ作用剂量的增加,Polη和Ub在L-02细胞内的荧光强度也逐渐增强,并且该两种蛋白在L-02细胞的共定位现象也具有随着HQ作用剂量的增加而增强的趋势.[结论]Polη与泛素在肝细胞内共定位并相互作用,而该种作用在HQ处理下能够以剂量依赖性方式得到加强.因此,可以认为Polη在HQ致肝细胞DNA损伤过程中所发挥的作用可能受到泛素化修饰和蛋白酶体降解机制的调控.
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