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目的：为了研究引物的偏嗜性对未培养放线菌多样性及群落结构的影响。方法：本研究应用基于16S rRNA基因序列系统发育分析的免培养方法对新疆塔里木盆地咸水滩高盐环境进行放线菌多样性分析。利用放线菌特异性引物S20/A 19扩增16S rRNA基因并构建基因克隆文库，同时采用新设计的放线菌引物ZY3F/ZY3R及ZY4F/ZY4R进行文库的构建。采用RFLP( Restriction Fragment Length Polymorphism限制性片段长度多态性)比较分析不同引物对文库构建的影响。结论：引物偏嗜性对未培养放线菌群落组成和物种多样性影响很大。用单一文库结果去检测、阐释环境微生物物种多样性，那么得到的信息将会导致严重的误差，不能较全面地揭示某一环境微生物多样性，将会造成研究者对生态环境的微生物信息评估严重失真。多套引物进行文库的构建会较大程度地减少偏嗜性对微生物多样性研究的影响。塔里木盆地咸水滩高盐环境蕴藏着放线菌物种新类型，有进一步的研究价值。