探讨节律分子Timeless对肝癌细胞生长的影响及其分子机制。
方法采用肝癌公共数据信息分析Timeless在肝癌及癌旁组织中的表达；在高表达Timeless的肝癌细胞株MHCC97H和低表达Timeless的肝癌细胞株MHCC97L中，分别用RNA干扰和真核表达质粒方法沉默或上调肝癌细胞中Timeless的表达后，采用实时荧光定量PCR和Western blot检测干扰和过表达Timeless的效果以及Timeless下游分子的表达。采用葡萄糖摄取实验、乳酸检测实验、细胞外液pH检测实验、细胞氧耗实验和MTS实验，分析Timeless对肝癌细胞糖酵解、氧化磷酸化和细胞生长的影响。
结果肝癌组织中Timeless的表达高于癌旁组织(P<0.05)。敲低Timeless后，Timeless干扰组1和Timeless干扰组2细胞葡萄糖相对摄取水平分别为0.510±0.119和0.508±0.099，与对照组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)；Timeless过表达组细胞葡萄糖相对摄取水平为1.953±0.324，与空质粒组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。Timeless干扰组1和Timeless干扰组2细胞乳酸产生相对水平分别为0.579±0.096和0.550±0.120，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；Timeless过表达组细胞乳酸产生相对水平为1.463±0.179，与空质粒组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。Timeless干扰组1和Timeless干扰组2细胞外pH值为7.390±0.035和7.370±0.060，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；Timeless过表达组细胞外pH值为7.130±0.031，与空质粒组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。Timeless干扰组1和Timeless干扰组2细胞耗氧率分别为3.686±0.389和3.955±0.431，与对照组(1.690±0.297)比较，差异有统计学意义(P<0.05)；Timeless过表达组细胞耗氧率为1.302±0.336，与空质粒组(3.185±0.262)比较，差异有统计学意义(P<0.05)。Timeless抑制p53的表达。与Timeless+p53对照组比较，Timeless+p53干扰组细胞葡萄糖相对摄取水平、乳酸产生相对水平、细胞外培养液pH和细胞氧耗率差异均无统计学意义(均P>0.05)；与Timeless+p53空质粒组比较，Timeless+p53过表达组细胞葡萄糖相对摄取水平、乳酸产生相对水平、细胞外培养液pH和细胞氧耗率差异均无统计学意义(均P>0.05)。Timeless通过抑制p53的表达促进肝癌细胞生长。
结论Timeless通过抑制p53的表达促进细胞糖酵解和抑制氧化磷酸化，进而促进肝癌细胞生长。