电脉冲刺激法提高小鼠miR-122表达的研究

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目的:电脉冲能够改变细胞膜的通透性,促进外源DNA进入细胞内。通过基因导入仪电脉冲刺激已注入质粒pcDNA3.0-miR-122的小鼠肌肉细胞,检测对小鼠miR-122表达的影响。方法:将扩增得到的pre-miR-122克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,构建pcDNA3.0-miR-122表达质粒。利用基因导入仪分别将生理盐水、pcDNA3.0、pcDNA3.0-miR-122质粒DNA导入小鼠腿部肌肉,然后进行电脉冲刺激。qRT-PCR测定各组小鼠血清及肝脏中的miR-122水平,同时检测肝癌组织和经Cecropin XJ处理的肝癌组织中的miR-122水平。结果:基因导入仪电脉冲刺激已注入pcDNA3.0-miR-122的腿部肌肉组织后,小鼠血清和肝脏中miR-122的表达分别提高了23和11倍,经Cecropin XJ处理的小鼠肝癌组织中miR-122的表达比对照高1.6倍。结论:电脉冲刺激能够显著提高小鼠体内miR-122的表达,为探讨miR-122表达对肝癌生长影响的调控作用奠定基础。 Purpose: Electric pulse can change the permeability of cell membrane and promote the entry of exogenous DNA into cells. The effect of mouse miR-122 expression on the mouse muscle cells that had been injected into the pcDNA3.0-miR-122 plasmid was stimulated by the gene transfer instrument. Methods: The amplified pre-miR-122 was cloned into eukaryotic expression vector pcDNA3.0 to construct pcDNA3.0-miR-122 expression plasmid. Saline, pcDNA3.0, pcDNA3.0-miR-122 plasmid DNA were introduced into the leg muscle of mice respectively by means of gene introduction instrument, and then stimulated by electric pulse. The levels of miR-122 in serum and liver of each group were detected by qRT-PCR, and the levels of miR-122 in both HCC tissues and Cecropin XJ-treated HCC tissues were detected. Results: The gene importer electroporation stimulated the injection of pcDNA3.0-miR-122 into the leg muscles, and the levels of miR-122 in the serum and liver increased by 23 and 11 times respectively. The mice treated with Cecropin XJ The expression of miR-122 in HCC was 1.6 times higher than that of the control. Conclusion: Electro-pulsed stimulation can significantly increase the expression of miR-122 in mice and lay a foundation for the regulation of miR-122 expression on the growth of HCC.
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