【摘 要】
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目的 观察腺病毒介导的LRIG1过表达是否能增强顺铂对膀胱癌细胞株EJ的损伤作用.方法 构建重组腺病毒载体包装pLRIG1-GFP质粒,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科
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目的 观察腺病毒介导的LRIG1过表达是否能增强顺铂对膀胱癌细胞株EJ的损伤作用.方法 构建重组腺病毒载体包装pLRIG1-GFP质粒,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法鉴定其是否能在膀胱癌细胞株EJ中上调LRIG1表达,并下调表皮生长因子(EGFR)的表达水平.通过采用单细胞凝胶电泳实验、流式细胞技术、免疫细胞化学染色及Matrigel侵袭实验,对比对照组、顺铂单药组、顺铂联合腺病毒载体组和顺铂联合腺病毒介导的LRIG1过表达组间细胞DNA损伤,细胞凋亡、增殖及侵袭能力.结果与对照组比较,顺铂在联合腺病毒介导的LRIG1过表达后,能下调细胞EGFR表达水平,同时显著增强肿瘤细胞DNA损伤程度(OTM值,对照组:2.54±0.54;CDDP组:4.57±0.79;CDDP/Ad-GFP组:5.38±1.16;CDDP/Ad-LRIG1组:9.45±2.64);引起细胞周期抑制[S期抑制,对照组:(40.82±2.11)%;CDDP组:(37.31±1.12)%,CDDP/Ad-GFP组:(37.57±2.52)%,CDDP/Ad-LRIG1组:(55.04±4.28)%];诱导细胞凋亡[细胞凋亡率,对照组:(2.63±2.49)%,CDDP组(3.49±1.94)%,CDDP/Ad-GFP组:(3.96±4.68)%,CDDP/Ad-LRIG1组:(12.56±0.77)%];抑制细胞增殖[细胞计数,对照组:(371.33±16.17)个;CDDP组:(224.67±88.06)个;CDDP/Ad-GFP组:(176.33±69.79)个;CDDP/Ad-LRIG1组:(138.33±8.39)个]并逆转细胞侵袭性[细胞侵袭数量,对照组:(259.40±9.21)个;CDDP组:(175.00±25.78)个;CDDP/Ad-GFP组:(157.20±22.79)个;CDDP/Ad-LRIG1组:(114.20±25.11)个].结论 腺病毒介导LRIG1过表达能增强顺铂对膀胱肿瘤细胞株EJ的损伤作用.
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