【摘 要】
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目的 探讨尿酸(UA)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响及其可能的机制.方法 体外培养大鼠GMC,应用不同浓度的UA(50、100、300μmol/L)刺激或应用细胞外信号调节激酶(ERK1/2
【机 构】
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南京医科大学附属南京儿童医院肾内科
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目的 探讨尿酸(UA)对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响及其可能的机制.方法 体外培养大鼠GMC,应用不同浓度的UA(50、100、300μmol/L)刺激或应用细胞外信号调节激酶(ERK1/2)特异性抑制剂U0126(10 μmol/L)、NADPH氧化酶特异性抑制剂夹竹桃麻素(500 μmol/L)、线粒体复合体Ⅰ抑制剂鱼藤酮(10 μmol/L)预处理30 min后,再加入UA(300 μmol/L).于实验终点收集细胞,应用3H-TdR掺入法、细胞计数及流式细胞术测定GMC增殖和细胞周期变化;应用实时定量PCR、Western印迹法检测细胞周期素cyclin D1和cyclin A2的表达及ERK1/2的磷酸化水平;应用荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内活性氧(ROS)的变化.结果 (1)与对照组相比,3H-TdR掺入法和细胞计数均显示,UA呈剂量依赖性促进GMC增殖,300 μmol/L UA刺激组其细胞数为对照组的1.5倍以上.(2)流式细胞术显示,UA呈剂量依赖性减少G1/G0期细胞数,增加S期细胞数,300 μmol/L UA刺激组其S期细胞数为对照组的2倍以上.(3)UA呈剂量依赖性促进系膜细胞周期蛋白cyclin D1和cyclin A2的表达.(4)UA呈剂量依赖性促进系膜细胞ERK1/2磷酸化且U0126能够抑制UA诱导的GMC增殖.细胞计数和3H-TdR掺入法分别显示,U0126的抑制率分别是UA 300 μmol/L刺激组的22%和31%(均P＜0.05).(5)UA呈剂量依赖性促进ROS产生增加,夹竹桃麻素能够明显抑制UA诱导的ROS生成、ERK1/2的磷酸化和系膜细胞增殖(均P＜0.05),而鱼藤酮对其无明显影响.结论 UA可促进GMC增殖,其可能的机制为UA诱导NADPH氧化酶来源的ROS产生增加,从而激活ERK1/2信号通路,引起周期蛋白表达增加,促进GMC增殖.
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