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目的 探讨抑制miR-429改善体外血脊髓屏障(blood spinal cord barrier,BSCB)通透性的可行性及机制,为改善脊髓微环境提供新的基因治疗靶点.方法 首先,取永生化人脑微血管内皮细胞系(hCMEC/D3),应用miR-429拮抗剂antagomiR-429及其阴性对照antagomiR-429-NC进行转染,通过荧光显微镜观察以及实时荧光定量PCR检测miR-429表达,验证antagomiR-429转染效率.然后观察miR-429对体外BSCB通透性的影响.实验分为4组,其中空白对照组(A组)为正常hCMEC/D3细胞、Ha-sc细胞构建BSCB模型,低氧诱导组(B组)、低氧诱导+antagomiR-429-NC组(C组)、低氧诱导+antagomiR-429组(D组)分别采用正常、antagomiR-429-NC转染以及antagomiR-429转染的hCMEC/D3细胞,与Ha-sc细胞构建BSCB模型并低氧处理12h.通过辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)通量测定体外BSCB通透性,实时荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光染色观测内皮细胞中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5的表达水平.结果 荧光显微镜下观察antagomiR-429及antagomiR-429-NC成功转染至hCMEC/D3细胞,转染效率约为90％;实时荧光定量PCR检测antagomiR-429组miR-429相对表达量为0.109±0.013,明显低于antagomiR-429-NC组的0.956±0.004 (P＜0.05).HRP通透性测量、实时荧光定量PCR及Western blot检测显示,B、C组HRP通透性明显高于A、D组,ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白及mRNA相对表达量均明显低于A、D组(P＜0.05);B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05),D组尚未达A组水平(P＜0.05).免疫荧光染色观察示D组ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白在细胞膜边界免疫荧光较B、C组增强,但尚未达A组强度.结论 通过抑制miR-429表达可促进微血管内皮细胞中ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表达,进而改善因低氧导致的BSCB通透性增高.