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摘要：目的 建立紫参胶囊的质量控制的方法。方法 采用薄层色谱法对方中的白芍、酸枣仁、百合、首乌藤进行定性鉴别。采用超高效液相色谱法对方中白芍的主要活性成分芍药苷进行含量测定。色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 ?m）；流动相：乙腈-水（16∶84）；流速：0.250 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：230 nm。结果 薄层色谱鉴别斑点清晰，易于鉴别。芍药苷在0.031～0.248 ?g范围内线性关系良好，r=0.999 9；平均加样回收率为99.30%，RSD=0.99%（n=6）。结论 本方法快速、简单，大大缩短了分析时间，可用于紫参胶囊定性定量研究。
关键词：紫参胶囊；薄层色谱法；超高液相色谱法；芍药苷；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.026
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）03-0067-03
紫参胶囊为国家中医临床研究基地安徽中医学院第一附属医院的医院制剂，由前期医院制剂紫参颗粒剂型改进而成，具有温肾填精、双调阴阳功效。前期已对紫参胶囊进行了初步的质量标准研究[1]，但随着技术方法的不断革新及2010年版《中华人民共和国药典》的颁布与实施，迫切需要对紫参胶囊定性定量的方法进行改进和优化研究，从而提高该制剂质量控制标准。本研究采用薄层色谱法进一步对紫参胶囊方中首乌藤、白芍、百合、酸枣仁进行定性鉴别，采用超高液相色谱法（UPLC）对方中臣药白芍的主要活性成分芍药苷进行含量测定，以期更好地对该制剂进行分析及相关质量控制，并为以后该制剂新药临床前研究提供相关基础资料。
1 仪器与试药
Waters Acquity H-Class UPLC超高效液相色谱仪（美国Waters公司），包括四元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、Acquity ELSD检测器以及Waters Empower2软件；KQ3200DB型数控超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）；0.22 ?m微孔滤膜（上海陆纳生物科技有限公司）；SK3200 H超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；CAMAG荧光灯（瑞士CAMAG公司）；CAMAG TLCPLATEHEATERⅢ加热板（瑞士CAMAG公司）；定量毛细管（瑞士CAMAG公司）；BP211D十万分之一电子天平（德国塞多利斯公司）；HH-S型水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂）；薄层硅胶G板（青岛海洋化工集团）；CANON数码照相机；CAMAG双槽展开缸；BCD-277西门子电冰箱；TF-18通风橱；D2F-6020真空干燥箱。
紫参胶囊（批号20110512、20110918、20120331，安徽中医学院第一附属医院制剂中心提供）。酸枣仁对照药材（批号121100-200702）、百合对照药材（批号121100-200702）、大黄素对照品（批号110756-201010）、芍药苷对照品（批号110736-201009）均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈（色谱纯，美国Tedia公司），蒸馏水（购自屈臣氏公司，批号20111014），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 白芍 取本品内容物5.0 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至1 mL，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品少量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例取除白芍外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照品溶液各5 ?L，对照品溶液2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（14∶6∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
2.1.2 酸枣仁 取本品内容物5.0 g，加石油醚（60～90 ℃） 50 mL，加热回流2 h，滤过，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇50 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至2 mL，作为供试品溶液。取酸枣仁对照药材1.0 g，同供试品溶液的制备方法，制得对照药材溶液。按处方比例取除酸枣仁外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[2]343。
2.1.3 百合 取本品内容物5.0 g，加甲醇50 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至2 mL，作为供试品溶液。取百合对照药材1.0 g，同供试品溶液的制备方法，制得对照药材溶液。按处方比例取除百合外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述供試品溶液、阴性对照品溶液各5 ?L，对照药材溶液10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[2]123。 2.1.4 首乌藤 取本品内容物5.0 g，加甲醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL使溶解，再加盐酸1 mL，加热回流30 min，冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，定容至1 mL，作为供试品溶液。取大黄素对照品少量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例取除首乌藤外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照品溶液各5 ?L，对照品溶液2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[2]249。
2.2 芍药苷的含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 ?m）色谱柱；流动相：乙腈-水（16∶84）；流速：0.250 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：230 nm；进样量：5.0 ?L[3]。
2.2.2 供试品溶液的制备 取胶囊内容物2.0 g，精密称定，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（频率53 kHz，功率150 W）30 min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液30 mL，蒸干，加甲醇使溶解，定容至10 mL，作为供试品溶液[4]。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 根据处方组成，按本品制备工艺制成缺白芍的阴性制剂，再按“2.2.2”项下方法制得阴性对照溶液。
2.2.4 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成0.031 mg/mL的溶液，作为芍药苷对照品溶液[5]。
2.2.5 系统适用性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5.0 ?L，在上述色谱条件下，用UPLC-PDA测定，结果供试品溶液色谱中芍药苷的保留时间与芍药苷对照品保留时间一致，与其他物质峰分离度大于1.5，理论塔板数均在2 000以上，被测定成分色谱峰的紫外光谱与各自对照品的紫外光谱一致；阴性对照品溶液色谱中与供试品中芍药苷相应的保留时间处无色谱峰出现。色谱图见图1。
2.2.6 线性关系考察 分别准确吸取1、2、4、6、8 ?L对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样，测定，以对照品溶液的体积为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程Y=50 714X-37 376，r=0.999 9。结果表明，芍药苷在0.031～0.248 ?g范围内，芍药苷进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度考察 取芍药苷对照品溶液（0.031 mg/mL）2 ?L，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积，芍药苷对照品峰面积值的RSD=0.11%，结果表明仪器的精密度良好。
2.2.8 稳定性试验 取同一批号（20120331）供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样2 ?L，注入液相色谱仪，测定并记录芍药苷的峰面积值，计算RSD=1.96%，结果表明芍药苷在24 h内稳定。
2.2.9 重复性试验 取同一批号（20120331）供试品6份，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，分别进样2 ?L，测定芍药苷峰面积，结果样品中芍药苷的平均含量為0.097 0 mg/g， RSD=0.46%（n=6）。结果表明本方法重复性良好。
2.2.10 加样回收率试验 取已知芍药苷含量的同一批样品（批号20120331）6份，每份精密称取1.0 g，分别精密加入芍药苷对照品溶液3.2 mL（0.031 mg/mL），按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，进样2 ?L，计算回收率，结果芍药苷平均回收率为99.30%，RSD=0.99%，表明回收率良好。结果见表1。
2.2.11 样品含量测定 取3批紫参胶囊（批号20110512、 20110918、20120331）各2.0 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，进样2 ?L，按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算紫参胶囊中芍药苷的含量。结果见表2。
3 讨论
在薄层色谱鉴别中，参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）首乌藤的薄层鉴别方法，采用乙醇进行提取，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，无对应斑点，分析得知，由于乙醇极性不够大，而本药采用水提工艺制备，含脂溶性成分很少，故改为极性更大的甲醇提取，结果斑点清晰无干扰。
在芍药苷含量测定过程中，供试品溶液制备方法分别考察了不同浓度乙醇、甲醇等溶剂进行回流、超声等方法[6]，结果表明，以甲醇超声提取效率较高、提取效果较好。本试验比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-磷酸溶液等比例及梯度洗脱等条件下对样品中芍药苷分离度的影响，结果发现，采用乙腈-水（16∶84）洗脱时芍药苷即能得到良好的分离。
参考文献：
[1] 刘晓闯，梁文珍，孟楣，等.紫参胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2008，14（4）：9-10.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[3] 周小平，蒋玉梅，周围，等.超高效液相色谱测定前列安通片中的芍药苷含量[J].中国卫生检验杂志，2008，18（1）：8-9.
[4] 王宛，王建明.HPLC法测定颈通茶中葛根素和芍药苷的含量[J].中国中医药科技，2010，17（6）：529.
[5] 孙小玲.HPLC法测定追风透骨片中芍药苷的含量[J].中国药师，2010， 13（6）：819.
[6] 谢文健.HPLC法测定莪棱胶囊中芍药苷的含量[J].中国药师，2010， 13（4）：592-593.
（收稿日期：2012-08-22，编辑：陈静）
关键词：紫参胶囊；薄层色谱法；超高液相色谱法；芍药苷；含量测定
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.026
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）03-0067-03
紫参胶囊为国家中医临床研究基地安徽中医学院第一附属医院的医院制剂，由前期医院制剂紫参颗粒剂型改进而成，具有温肾填精、双调阴阳功效。前期已对紫参胶囊进行了初步的质量标准研究[1]，但随着技术方法的不断革新及2010年版《中华人民共和国药典》的颁布与实施，迫切需要对紫参胶囊定性定量的方法进行改进和优化研究，从而提高该制剂质量控制标准。本研究采用薄层色谱法进一步对紫参胶囊方中首乌藤、白芍、百合、酸枣仁进行定性鉴别，采用超高液相色谱法（UPLC）对方中臣药白芍的主要活性成分芍药苷进行含量测定，以期更好地对该制剂进行分析及相关质量控制，并为以后该制剂新药临床前研究提供相关基础资料。
1 仪器与试药
Waters Acquity H-Class UPLC超高效液相色谱仪（美国Waters公司），包括四元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、Acquity ELSD检测器以及Waters Empower2软件；KQ3200DB型数控超声波清洗器（江苏昆山超声仪器有限公司）；0.22 ?m微孔滤膜（上海陆纳生物科技有限公司）；SK3200 H超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；CAMAG荧光灯（瑞士CAMAG公司）；CAMAG TLCPLATEHEATERⅢ加热板（瑞士CAMAG公司）；定量毛细管（瑞士CAMAG公司）；BP211D十万分之一电子天平（德国塞多利斯公司）；HH-S型水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂）；薄层硅胶G板（青岛海洋化工集团）；CANON数码照相机；CAMAG双槽展开缸；BCD-277西门子电冰箱；TF-18通风橱；D2F-6020真空干燥箱。
紫参胶囊（批号20110512、20110918、20120331，安徽中医学院第一附属医院制剂中心提供）。酸枣仁对照药材（批号121100-200702）、百合对照药材（批号121100-200702）、大黄素对照品（批号110756-201010）、芍药苷对照品（批号110736-201009）均由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈（色谱纯，美国Tedia公司），蒸馏水（购自屈臣氏公司，批号20111014），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 白芍 取本品内容物5.0 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至1 mL，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品少量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例取除白芍外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照品溶液各5 ?L，对照品溶液2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（14∶6∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。
2.1.2 酸枣仁 取本品内容物5.0 g，加石油醚（60～90 ℃） 50 mL，加热回流2 h，滤过，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇50 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至2 mL，作为供试品溶液。取酸枣仁对照药材1.0 g，同供试品溶液的制备方法，制得对照药材溶液。按处方比例取除酸枣仁外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述3种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[2]343。
2.1.3 百合 取本品内容物5.0 g，加甲醇50 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，定容至2 mL，作为供试品溶液。取百合对照药材1.0 g，同供试品溶液的制备方法，制得对照药材溶液。按处方比例取除百合外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述供試品溶液、阴性对照品溶液各5 ?L，对照药材溶液10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[2]123。 2.1.4 首乌藤 取本品内容物5.0 g，加甲醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 mL使溶解，再加盐酸1 mL，加热回流30 min，冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，定容至1 mL，作为供试品溶液。取大黄素对照品少量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例取除首乌藤外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法（2010年版《中华人民共和国药典》一部附录ⅥB）试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照品溶液各5 ?L，对照品溶液2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[2]249。
2.2 芍药苷的含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 ?m）色谱柱；流动相：乙腈-水（16∶84）；流速：0.250 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：230 nm；进样量：5.0 ?L[3]。
2.2.2 供试品溶液的制备 取胶囊内容物2.0 g，精密称定，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理（频率53 kHz，功率150 W）30 min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液30 mL，蒸干，加甲醇使溶解，定容至10 mL，作为供试品溶液[4]。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 根据处方组成，按本品制备工艺制成缺白芍的阴性制剂，再按“2.2.2”项下方法制得阴性对照溶液。
2.2.4 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成0.031 mg/mL的溶液，作为芍药苷对照品溶液[5]。
2.2.5 系统适用性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各5.0 ?L，在上述色谱条件下，用UPLC-PDA测定，结果供试品溶液色谱中芍药苷的保留时间与芍药苷对照品保留时间一致，与其他物质峰分离度大于1.5，理论塔板数均在2 000以上，被测定成分色谱峰的紫外光谱与各自对照品的紫外光谱一致；阴性对照品溶液色谱中与供试品中芍药苷相应的保留时间处无色谱峰出现。色谱图见图1。
2.2.6 线性关系考察 分别准确吸取1、2、4、6、8 ?L对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进样，测定，以对照品溶液的体积为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程Y=50 714X-37 376，r=0.999 9。结果表明，芍药苷在0.031～0.248 ?g范围内，芍药苷进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度考察 取芍药苷对照品溶液（0.031 mg/mL）2 ?L，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积，芍药苷对照品峰面积值的RSD=0.11%，结果表明仪器的精密度良好。
2.2.8 稳定性试验 取同一批号（20120331）供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样2 ?L，注入液相色谱仪，测定并记录芍药苷的峰面积值，计算RSD=1.96%，结果表明芍药苷在24 h内稳定。
2.2.9 重复性试验 取同一批号（20120331）供试品6份，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，分别进样2 ?L，测定芍药苷峰面积，结果样品中芍药苷的平均含量為0.097 0 mg/g， RSD=0.46%（n=6）。结果表明本方法重复性良好。
2.2.10 加样回收率试验 取已知芍药苷含量的同一批样品（批号20120331）6份，每份精密称取1.0 g，分别精密加入芍药苷对照品溶液3.2 mL（0.031 mg/mL），按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，进样2 ?L，计算回收率，结果芍药苷平均回收率为99.30%，RSD=0.99%，表明回收率良好。结果见表1。
2.2.11 样品含量测定 取3批紫参胶囊（批号20110512、 20110918、20120331）各2.0 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，进样2 ?L，按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算紫参胶囊中芍药苷的含量。结果见表2。
3 讨论
在薄层色谱鉴别中，参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）首乌藤的薄层鉴别方法，采用乙醇进行提取，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，无对应斑点，分析得知，由于乙醇极性不够大，而本药采用水提工艺制备，含脂溶性成分很少，故改为极性更大的甲醇提取，结果斑点清晰无干扰。
在芍药苷含量测定过程中，供试品溶液制备方法分别考察了不同浓度乙醇、甲醇等溶剂进行回流、超声等方法[6]，结果表明，以甲醇超声提取效率较高、提取效果较好。本试验比较了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-磷酸溶液等比例及梯度洗脱等条件下对样品中芍药苷分离度的影响，结果发现，采用乙腈-水（16∶84）洗脱时芍药苷即能得到良好的分离。
参考文献：
[1] 刘晓闯，梁文珍，孟楣，等.紫参胶囊质量标准研究[J].中国实验方剂学杂志，2008，14（4）：9-10.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.
[3] 周小平，蒋玉梅，周围，等.超高效液相色谱测定前列安通片中的芍药苷含量[J].中国卫生检验杂志，2008，18（1）：8-9.
[4] 王宛，王建明.HPLC法测定颈通茶中葛根素和芍药苷的含量[J].中国中医药科技，2010，17（6）：529.
[5] 孙小玲.HPLC法测定追风透骨片中芍药苷的含量[J].中国药师，2010， 13（6）：819.
[6] 谢文健.HPLC法测定莪棱胶囊中芍药苷的含量[J].中国药师，2010， 13（4）：592-593.
（收稿日期：2012-08-22，编辑：陈静）